[发明专利]一种卡非佐米中间体的异构体检测方法

说明书

本发明涉及一种卡非佐米中间体的异构体检测方法。提供一种高效、简便、灵敏的液相色谱检测方法，用于卡非佐米中间体异构体的检测。在本发明的色谱检测条件下，仅需采用常规的供试品制备方法，无需对目标成分高度纯化，即可有效的分离供试品中的异构体。该方法操作简便、分离度好、检测时间相对较短，灵敏度高，适于工业化生产中异构体测定。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种卡非佐米中间体的异构体检测方法。

背景技术

卡非佐米，是一种蛋白酶体抑制剂，适用为治疗多发性骨髓瘤患者。多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是起源于B细胞系的恶性肿瘤，其特征在于恶性浆细胞在骨髓微环境克隆增殖，引起骨折和骨髓功能衰竭，是全球第二个最常见的血液系统肿瘤，依靠传统的化疗方案不能够治愈。硼替佐米(Brotezomib)是第一个蛋白酶体抑制剂，由于其较强的耐药性及人们对其耐药机制的不断研究，卡非佐米(Carfilzomib)继硼替佐米后，被FDA批准为第二个蛋白酶体抑制剂，用于治疗之前接受至少2种药物(包括硼替佐米和免疫调节剂治疗)的多发性骨髓瘤患者。

本专利涉及的卡非佐米中间体化学名为苄基((S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-苯丁酰)-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸，其分子中含有三个手性碳原子，为提高控制成品卡非佐米质量，中间体手性异构体含量需严格控制。

本品分子结构如式Ⅰ：

目前文献公开了一些分离本品异构体的方法，但是异构体数量较少，暂未发现一种高效、简便、灵敏的分离较多异构体方法。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种高效、简便、灵敏的液相色谱检测方法，用于卡非佐米中间体异构体的检测。

本发明的技术方案为：

一种卡非佐米中间体的异构体检测方法，其特征在于：以键合纤维素－三(3,5－二氯苯基氨基甲酸酯)硅胶手性柱(CHIRALCEL IC)为色谱柱，以正己烷-异丙醇-三氟乙酸为流动相，采用梯度洗脱。

本发明所述方法的色谱条件中，以正己烷-异丙醇-三氟乙酸＝97-93:3-7:0.1为流动相A，以正己烷-异丙醇-三氟乙酸＝67-63:33-37:0.1为流动相B；梯度洗脱程序如下：

本发明所述色谱条件中，流动相A为正己烷-异丙醇-三氟乙酸＝95:5:0.1；流动相B 为正己烷-异丙醇-三氟乙酸＝65:35:0.1；检测波长为210nm，柱温为20℃，所述色谱柱为CHIRALCEL IC手性柱。

本发明进一步提供一种卡非佐米中间体的异构体检测方法，采用正相高效液相色谱方法，所述方法包含以下步骤：

1、供试品溶液制备：取本品适量，加正己烷-异丙醇＝80:20，超声，溶解即可；

2、色谱检测：以CHIRALCEL IC手性柱为色谱柱，以正己烷-异丙醇-三氟乙酸＝95:5:0.1为流动相A，以正己烷-异丙醇-三氟乙酸＝65:35:0.1为流动相B；检测波长为210nm，柱温20℃，流速为1.0mL/min。进样量为10μL。

采用如下梯度洗脱程序洗脱：

本发明人在长期的实验研究中发现，色谱填料、流动相、洗脱梯度等色谱条件对卡非佐米中间体的异构体分离效果有显著影响，色谱条件选择不当会导致目标峰无法分离、检测时间延长、峰形差、无法准确定性定量等问题。本发明人经过反复摸索和尝试，最终发现在本发明的色谱检测条件下，仅需采用常规的供试品制备方法，无需对目标成分高度纯化，即可有效的分离供试品中的异构体，该方法操作简便、分离度好、检测时间相对较短，灵敏度高，适于工业化生产中异构体测定。

附图说明