[发明专利]一种对羟基苯甲酸的微生物合成方法

权利要求书

1.一种对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将刺孢小克银汉霉菌菌株经过斜面培养、种子培养和发酵培养，得到刺孢小克银汉霉菌发酵液；

2)将刺孢小克银汉霉菌发酵液萃取分离，得到粗产物；

3)将所述的粗产物分离纯化，得到对羟基苯甲酸。

2.根据权利要求1所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其特征在于，所述的斜面培养包括：将刺孢小克银汉霉菌菌株接种至LB斜面培养基，在35-40℃培养2-3d，获得斜面菌体；

所述的种子培养包括：将斜面菌体接种至种子培养基，在35-40℃、150-200rpm条件下培养2-5d，获得种子液；

所述的发酵培养包括：将所述的种子液接种至发酵培养基，在30-40℃、150-200rpm条件下发酵培养2-4d，得到刺孢小克银汉霉菌发酵液。

3.根据权利要求2所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其特征在于，所述的LB斜面培养基以1L计，组成包括：100g马铃薯提取液，3-5g葡萄糖，5-10g氯化钠，10-15g琼脂，3-5g磷酸二氢钾，0.04-0.06g维生素B，加水至1L混合均匀获得；

所述的种子培养基以1L计，组成包括：100g马铃薯提取液，5-8g葡萄糖，5-10g氯化钠，0.2-0.5g硫酸镁，3-5g磷酸二氢钾，0.04-0.06g维生素B，加水至1L混合均匀获得；

所述的发酵培养基以1L计，组成包括：100g马铃薯提取液，5-8g葡萄糖，5-10g氯化钠，1-2g磷酸氢二钠，30-50mg氯化铵，10-20mg硫酸锰，加水至1L混合均匀获得。

4.根据权利要求3所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其特征在于，所述的马铃薯提取液为马铃薯切碎，加蒸馏水煮沸30min后，静置得到的上层清液。

5.根据权利要求1所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其特征在于，所述的萃取分离包括：将刺孢小克银汉霉菌发酵液用乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩，得到粗提取物；将所述的粗提取物用石油醚溶解，硅藻土过滤，得到粗产物。

6.根据权利要求1所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其特征在于，所述的分离纯化是将粗产物过ODS反相柱，进行梯度洗脱，除溶剂，获得对羟基苯甲酸。

7.根据权利要求6所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其特征在于，所述的梯度洗脱的洗脱液为甲醇水溶液；

洗脱参数包括：设置四个洗脱梯度，洗脱液分别为5vt％、10vt％、15vt％、20vt％的甲醇水溶液，TCL跟踪监测，收集含对羟基苯甲酸的洗脱液。

8.根据权利要求1所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其特征在于，所述的对羟基苯甲酸的纯度大于99％。