[发明专利]一种对羟基苯甲酸的微生物合成方法

说明书

本发明公开了一种对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其包括以下步骤：1)将刺孢小克银汉霉菌菌株经过斜面培养、种子培养和发酵培养，得到刺孢小克银汉霉菌发酵液；2)将刺孢小克银汉霉菌发酵液萃取分离，得到粗产物；3)将所述的粗产物分离纯化，得到对羟基苯甲酸。本发明通过从刺孢小克银汉霉菌发酵液中提取分离对羟基苯甲酸，整个提取过程可以在常温常压下进行，无需使用苯酚，对环境污染小，能耗小，满足绿色生产的需求；制备方法简单，适用于工业化生产；纯度大于99％，可直接用于生产原料。

技术领域

本发明涉及合成领域，具体涉及一种对羟基苯甲酸的微生物合成方法。

背景技术

对羟基苯甲酸是一种用途非常广发的有机合成原料，可用于制备液晶高分子聚合、紫外线吸收剂、热敏染料显色剂、彩色胶片和塑料的合成。其酯类衍生物已在食品药品的防腐杀菌广泛应用。

对羟基苯甲酸的合成方法有多种，如苯酚钾羧化法，水杨酸加热制取法，对氨基苯酚重氮化法，桑德迈尔反应法等，其合成工艺需要在高温高压下进行，存在能源消耗大、成本高、产量低等问题。特别在合成过程中有环境污染物质苯酚等的生成，给工业排水处理造成了极大困难。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供对羟基苯甲酸的微生物合成方法，旨在通过绿色高效的方法合成对羟基苯甲酸。

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

一种对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将刺孢小克银汉霉菌菌株经过斜面培养、种子培养和发酵培养，得到刺孢小克银汉霉菌发酵液；

2)将刺孢小克银汉霉菌发酵液萃取分离，得到粗产物；

3)将所述的粗产物分离纯化，得到对羟基苯甲酸。

所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其中所述的斜面培养包括：将刺孢小克银汉霉菌菌株接种至LB斜面培养基，在35-40℃培养2-3d，获得斜面菌体。

所述的种子培养包括：将斜面菌体接种至种子培养基，在35-40℃、150-200rpm条件下培养2-5d，获得种子液；

所述的发酵培养包括：将所述的种子液接种至发酵培养基，在30-40℃、150-200rpm条件下发酵培养2-4d，得到刺孢小克银汉霉菌发酵液。

所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其中所述的LB斜面培养基以1L计，组成包括：100g马铃薯提取液，3-5g葡萄糖，5-10g氯化钠，10-15g琼脂，3-5g磷酸二氢钾，0.04-0.06g维生素B，加水至1L混合均匀获得；

所述的种子培养基以1L计，组成包括：100g马铃薯提取液，5-8g葡萄糖，5-10g氯化钠，0.2-0.5g硫酸镁，3-5g磷酸二氢钾，0.04-0.06g维生素B，加水至1L混合均匀获得；

所述的发酵培养基以1L计，组成包括：100g马铃薯提取液，5-8g葡萄糖，5-10g氯化钠，1-2g磷酸氢二钠，30-50mg氯化铵，10-20mg硫酸锰，加水至1L混合均匀获得。

所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其中所述的马铃薯提取液为马铃薯切碎，加蒸馏水煮沸30min后，静置得到的上层清液。

所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其中所述的萃取分离包括：将刺孢小克银汉霉菌发酵液用乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩，得到粗提取物；将所述的粗提取物用石油醚溶解，硅藻土过滤，得到粗产物。

所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其中所述的分离纯化是将粗产物过ODS反相柱，进行梯度洗脱，除溶剂，获得对羟基苯甲酸。

所述的对羟基苯甲酸的微生物合成方法，其中所述的梯度洗脱的洗脱液为甲醇水溶液；