[发明专利]用于提取糖化血红蛋白的磁性微球的制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于提取糖化血红蛋白的磁性微球的制备方法：其特征在于：包括如下步骤，

S1）磁性颗粒的制备步骤

称取无水三氯化铁，聚乙二醇2000，在乙二醇中搅拌至溶解，再向其中加入三水合乙酸钠，继续搅拌，将溶解好的液体转移至水热釜中持续加热，反应结束后，冷却至室温，分别用蒸馏水和无水乙醇洗涤，真空干燥得到Fe₃O₄磁性颗粒；

S2）Fe₃O₄磁性颗粒油酸修饰步骤

向反应瓶中加入S1）步骤得到的Fe₃O₄磁性颗粒、蒸馏水，超声分散后，于水浴中快速搅拌，然后加入油酸，并继续搅拌，反应结束后，冷却至室温，分别用蒸馏水和无水乙醇洗涤磁性颗粒，真空干燥得到油酸修饰的Fe₃O₄磁性颗粒；

S3）用于提取糖化血红蛋白的磁性微球的制备步骤

向反应瓶中依次加入S2）步骤得到的油酸修饰的Fe₃O₄磁性颗粒、十二烷基磺酸钠、二乙烯基苯、4-乙烯基苯硼酸、蒸馏水，超声溶解分散后将反应瓶转至水浴中搅拌，然后向其中加入过硫酸钾，继续搅拌，反应结束后分别用无水乙醇和蒸馏水洗涤产物，真空干燥得到用于提取糖化血红蛋白的磁性微球。

2.根据权利要求1所述的一种用于提取糖化血红蛋白的磁性微球的制备方法步，其特征在于：在S1）步骤中，持续加热的温度为250℃，加热时长为8h。

3.根据权利要求1所述的一种用于提取糖化血红蛋白的磁性微球的制备方法，其特征在于：在S1）步骤、S2）步骤中，均用蒸馏水和无水乙醇洗涤三遍。

4.根据权利要求1所述的一种用于提取糖化血红蛋白的磁性微球的制备方法，其特征在于：Fe₃O₄磁性颗粒的粒径为300 nm-800 nm。

5.根据权利要求1所述的一种用于提取糖化血红蛋白的磁性微球的制备方法，其特征在于：

在S1）步骤中的真空干燥的温度是60℃（±10℃），时间是6h（±2h）；

在S2）步骤、S3）步骤中的真空干燥的温度是60℃（±10℃），时间是3h（±1h）。

6.一种应用磁性微球提取血液中糖化血红蛋白的方法，其特征在于：其中磁性微球由权利要求1-5中任意一项的制备方法制得，包括如下步骤，

S1）全血样本裂解步骤

在离心管中加入全血样本和去离子水，于混匀器上混匀；

S2）磁性微球吸附糖化血红蛋白步骤

向离心管中加入所述的磁性微球，于混匀器上混匀；

S3）洗脱糖化血红蛋白步骤

将离心管放置于磁分离器中，静置，待吸清后弃去上清，用磷酸盐或Tris-HCl缓冲液洗涤磁性微球并弃去，最后取山梨醇缓冲液重悬磁性微球，进行震荡、磁吸，保留上清液，得到纯化好的糖化血红蛋白样品，并于4℃中保存，待用；

S4）电泳检测提取的糖化血红蛋白纯度步骤

取提取的糖化血红蛋白样品在SDS-PAGE电泳中上样，检测样本蛋白纯度。

7.根据权利要求6所述的应用磁性微球提取血液中糖化血红蛋白的方法，其特征在于：S3）步骤中，用0.01-0.1 mol/L磷酸盐缓冲液洗涤磁性微球两遍并弃去。