[发明专利]一种番鸭应激快速检测方法及其防控方法

权利要求书

1.一种番鸭应激快速检测方法，其特征在于，具体步骤为：获取番鸭血液，提取RNA，然后反转录cDNA，通过荧光定量PCR方法检测Hsp70表达量，其中引物为：

F:5’-TAGTCACAAAGCCAAAACCC-3’，R:5’-CCCACTGTTGCCATCCC-3’。

2.根据权利要求1所述的一种番鸭应激快速检测方法，其特征在于，Hsp70快速检测序列为：

TAGTCACAAA^oGCCAAAACCC^oAAAGTTGAAC^oTCCCAAAGGA^oGGAGCAGAAA^oCCAGCTGAAC^oCGAATGGACC^oAGTAGAAGGC^oCAGGGGGATG^oGCAACAGTGG^oG，总长101bp。

3.根据权利要求1所述的一种番鸭应激快速检测方法，其特征在于，所述荧光定量PCR方法的扩增体系的总反应体积为20μL，其中2×PerfectStartTM Green qPCR SuperMix为10μL；Hsp70-F为0.4μL；Hsp70-R为0.4μL；Passive Reference Dye为0.4μL；cDNA为5μL；Nuclease-free Water为3.8μL；

所述荧光定量PCR方法的扩增条件为：94℃,预变性10min；目的基因以94℃、10s，58℃、30s，72℃、32s进行循环扩增32次；对溶解曲线进行分析，控制条件为94℃、15s；60℃、60s；94℃、15s；60℃、15s。

4.根据权利要求1所述的一种番鸭应激快速检测方法，其特征在于，所述Hsp70表达量的绝对定量方法为：标准曲线为y＝-1.96x+18.2(r＝0.983)，其中y为CT值，Hsp70表达量为1.35×10^8+x拷贝，即1.5×10^xpg/ml。

5.根据权利要求1所述的一种番鸭应激快速检测方法，所述番鸭血液为翅膀静脉血液。

6.根据权利要求1所述的一种番鸭应激快速检测方法，其特征在于，所述Hsp70表达量的相对定量方法为：以GAPDH为内参，对番鸭的组织器官使用2-^ΔΔCt法检测番鸭应激水平。

7.根据权利要求6所述的一种番鸭应激快速检测方法，所述器官为心脏、肝脏、脾脏和小肠其中一种或一种以上。

8.一种番鸭应激防控方法，其特征在于，该方法使用权利要求1-5所述的一种番鸭应激快速检测方法，抽取番鸭血液，检测其Hsp70表达量，当Hsp70表达量，Hsp70表达量大于0.3ng/ml时，将抗应激药物和拌料混合饲喂番鸭，连续饲喂5d。

9.根据权利要求8所述的一种番鸭应激防控方法，其特征在于，抗应激药物和饲料质量分数比为1.5～3.5：96.5～98.5。