[发明专利]一种番鸭应激快速检测方法及其防控方法

说明书

本发明涉及畜禽养殖技术领域，尤其涉及一种番鸭应激快速检测方法及其防控方法。本发明旨在解决番鸭处于应激反应时，会危害番鸭健康，同时会降低番鸭肉品质，现有技术缺少有效、快速、准确检测番鸭应激反应的方法的问题。本发明的番鸭应激快速检测方法的具体步骤为：获取番鸭血液，提取RNA，然后反转录cDNA，通过荧光定量PCR方法检测Hsp70表达量。本发明实现了番鸭应激反应的快速、准确检测，利用荧光定量PCR检测Hsp70表达量，实现了番鸭应激检测的快速、准确，最快可1h可获得检测结果，番鸭处于机体应激番鸭初期即可通过本发明准确获知，即Hsp70表达量高于0.3ng/ml时就处于应激反应。

技术领域

本发明涉及畜禽养殖技术领域，尤其涉及一种番鸭应激快速检测方法及其防控方法。

背景技术

动物应激反应是动物机体在受到环境变化、疾病感染等不利因素刺激产生的一种非特异性应答反应。适量的应激反应是机体对外界变化的适应性应答，有助于提高机体免疫力；但过量的应激反应对机体会造成严重伤害，不仅影响机体的健康，还会对畜禽肉品质产生严重影响，降低肉品质。当前，番鸭养殖中，南方高热高湿、饲料或饮水中重金属污染、长途运输、疾病都是造成番鸭应激反应的重要因素，也是影响番鸭品质的主要影响因子。如何快速检测番鸭是否处于过度应激反应，并通过有效技术手段防控番鸭应激反应，降低应激反应对番鸭健康的影响，并减少应激反应对番鸭肉品质的影响，具有重要意义。Hsp70是热休克蛋白家族中主要评价机体应激反应的热休克蛋白，在机体正常的水平状态下其含量较低，一旦机体受到应激，其含量就会明显升高，是作为动物应激反应的重要标志物。

现有技术还没有一种有效快速准确检测番鸭应激的技术方法。基于此，提出本发明。

发明内容

(1)要解决的技术问题

针对现有技术中的不足，本发明提供了一种番鸭应激快速检测方法及其防控方法。本发明旨在解决番鸭处于应激反应时，会危害番鸭健康，同时会降低番鸭肉品质，现有技术缺少有效、快速、准确检测番鸭应激反应的方法的问题，本发明实现了番鸭应激反应的快速、准确检测，利用荧光定量PCR检测Hsp70表达量，实现了番鸭应激检测的快速、准确，最快可1h可获得检测结果，番鸭处于机体应激番鸭初期即可通过本发明准确获知，即Hsp70表达量高于0.3ng/ml时就处于应激反应。

(2)技术方案

为了克服上述技术问题，本发明提供了一种番鸭应激快速检测方法，具体步骤为：获取番鸭血液，提取RNA，然后反转录cDNA，通过荧光定量PCR方法检测Hsp70表达量，其中引物为：

F:5’-TAGTCACAAAGCCAAAACCC-3’，R:5’-CCCACTGTTGCCATCCC-3’。

更为优选的是，Hsp70快速检测序列为：

TAGTCACAAA°GCCAAAACCC°AAAGTTGAAC°TCCCAAAGGA°GGAGCAGAAA°CCAGCTGAAC°CGAATGGACC°AGTAGAAGGC°CAGGGGGATG°GCAACAGTGG°G，总长101bp。

更为优选的是，所述荧光定量PCR方法的扩增体系的总反应体积为20μL，其中2×PerfectStartTM Green qPCR SuperMix为10μL；Hsp70-F为0.4μL；Hsp70-R为0.4μL；Passive Reference Dye为0.4μL；cDNA为5μL；Nuclease-free Water为3.8μL；所述荧光定量PCR方法的扩增条件为：94℃，预变性10min，目的基因以94℃、10s，58℃、30s，72℃、32s进行循环扩增32次；对溶解曲线进行分析，控制条件为94℃、15s；60℃、60s；94℃、15s；60℃、15s。