[发明专利]CE-SDS方法优化及其在抗体纯度检测中的应用

说明书

本发明公开了一种优化的CE‑SDS纯度检测方法及其应用。所述检测方法分别对非还原条件下碘乙酰胺、十二烷基磺酸钠和还原条件下SDS和二硫苏糖醇试剂的浓度进行了添加和调整，同时延长了样品加热处理时间；所述检测方法具备抗体纯度检测重复性好、准确度高、操作方便等优点，同时能够节省方法开发的时间和费用等，提高了抗体纯度检测的效率和准确率，为抗体制备和分析提供了一种高效优质的检测方法。

技术领域

本方法涉及生物技术领域，具体涉及一种优化的CE-SDS纯度检测方法及其在单克隆抗体纯度检测中的应用。

背景技术

抗体纯度是抗体生产过程中的重要指标，SEC-HPLC(分子筛排阻层析高效液相色谱)和CE-SDS(十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳)是目前最常用于纯度检测的两种方法。其中，SEC-HPLC是检测抗体在非还原非变性条件下的纯度，具有高通量、重复性好等优点；考虑到抗体本身是由两条重链和两条轻链组成的异源四聚体，只凭借SEC-HPLC的方法无法对抗体结构的完整性作出准确判断，因此，CE-SDS在近几年也被广泛应用于抗体纯度的检测。

CE-SDS是一种在变性条件下检测抗体纯度的方法，方法原理与SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)类似，但与SDS-PAGE相比，CE-SDS利用毛细管电泳进行样品的分离，并通过将荧光染料加入样品中进行分析检测，因此具有上样量小、通量大、分辨率高、可精确定量等优点。

目前市面上商业化的CE-SDS试剂盒和芯片主要针对普通蛋白质进行的开发，其试剂浓度和处理方法并不能完全适用于单克隆抗体的检测，因此优化CE-SDS检测方法使之更加适用于单克隆抗体的检测具有重要的意义，是单克隆抗体制备和分析重要的辅助手段。

发明内容

本发明的目的在于解决上述现有技术的不足，提供一种优化的CE-SDS纯度检测方法，使之能够普遍应用于单克隆抗体纯度检测。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案:

一种优化的CE-SDS纯度检测方法，包括如下步骤：

步骤1.样品处理液的配置：分别配置非还原样品处理液(a1)和还原样品处理液(a2)；所述非还原样品处理液(a1)为：20μL样品缓冲液与2μL IAM储液和1μL SDS储液混合；所述还原样品处理液(a2)为：20μL样品缓冲液与1.2μL DTT储液混合；所述样品缓冲液为HTProtein Express Sample Buffer，PerkinElmer--CLS920003。

较佳的，所述IAM储液浓度为0.5M，储存体积为每管50-100μL，储存温度为-40℃，保质期3个月。

较佳的，所述SDS储液浓度为10％(w/v)，储存体积为每管50-100μL，储存温度为室温25℃，保质期3个月。

较佳的，所述DTT储液浓度为1M，储存体积为每管50-100μL，储存温度为-40℃，保质期3个月。

较佳的，上述IAM、SDS和DTT储液均使用去离子水进行溶解和配置，并使用0.22μm滤膜进行过滤处理；

较佳的，上述分装的IAM、SDS和DTT储液每次检测各取用一管，每管仅使用一次，不得重复使用。

步骤2.将样品处理液与样品混合，具体包括以下步骤：

1).混合成非还原样品(b1)：将21μL非还原处理液(a1)与3μL抗体溶液混合；

2).混合成还原样品(b2)：将21μL还原处理液(a2)与3μL抗体溶液混合。

较佳的，上述抗体可为任意单克隆抗体，包括单特异性抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、纳米抗体和抗体融合蛋白中的一种或多种。