[发明专利]用于提取净化尿液中三苯代谢物的高分子复合微球、制备方法、试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种用于提取净化尿液中三苯代谢物的高分子复合微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤a、制备交联琼脂糖微球，粒径为10-200μm；

步骤b、通过沉淀聚合反应，在引发剂AIBN作用下，以交联剂二乙烯苯和功能单体氯化N,N,N-三甲基-(1-(4-乙烯基苯基))甲胺为聚合单体，在交联琼脂糖表面实现季胺功能化高分子聚合物修饰，制备得到亲水性季胺功能化交联琼脂糖高分子复合微球。

2.根据权利要求1所述的用于提取净化尿液中三苯代谢物的高分子复合微球的制备方法，其特征在于，所述步骤b中各原料的重量分数为：交联琼脂糖微球1-5份、二乙烯苯3-5份、氯化N,N,N-三甲基-(1-(4-乙烯基苯基))甲胺1-5份、AIBN 0.2-0.5份。

3.根据权利要求2所述的用于提取净化尿液中三苯代谢物的高分子复合微球的制备方法，其特征在于，所述步骤b具体包括：将交联琼脂糖微球超声分散于异丙醇中得到分散液；将二乙烯苯、氯化N,N,N-三甲基-(1-(4-乙烯基苯基))甲胺和AIBN溶解于乙腈中，并加入到上述分散液中；机械搅拌下升温至75-80℃，维持20-30min，快速升温至85-90℃，冷凝回流16-24h；将反应得到的产物使用纯水与乙醇清洗，得到亲水性季胺功能化交联琼脂糖高分子复合微球。

4.一种用于提取净化尿液中三苯代谢物的高分子复合微球，其特征在于，由如权利要求1-3任一所述的制备方法制得。

5.一种试剂盒，其特征在于，包括吸附材料分散液和分散固相萃取瓶，所述吸附材料分散液的溶质为如权利要求4所述的用于提取净化尿液中三苯代谢物的高分子复合微球。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述分散固相萃取瓶包括瓶体、滤筒、端盖、封盖和隔垫，所述瓶体和所述滤筒上下两端开口，所述端盖设置在所述瓶体的下端并与所述瓶体可拆卸连接，所述滤筒从所述瓶体的上端开口进入所述瓶体，所述滤筒的下端设有过滤膜，所述过滤膜覆盖所述滤筒的下端开口，所述隔垫覆盖所述滤筒的上端开口，所述封盖与所述滤筒的上端连接并压紧所述隔垫。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述吸附材料分散液的溶剂为硼砂缓冲液，pH为7.5-9.5。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述吸附材料分散液中高分子复合微球的浓度为5-20g/L。

9.一种尿液中三苯代谢物的提取方法，其特征在于，使用如权利要求6所述的试剂盒，所述提取方法包括以下步骤：

步骤一、将分散固相萃取瓶的滤筒上拉至最高位置，打开瓶体的端盖，移取并向瓶体内加入200μL尿液样品，再加入1.0mL吸附材料分散液，关闭端盖，涡旋提取，将滤筒推至瓶体底部，上清液进入滤筒，打开滤筒的封盖，弃去上清液；

步骤二、将滤筒上拉至最高位置，打开端盖，向瓶体内加入1mL水清洗，涡旋淋洗，推动滤筒至瓶体底部使上清液进入滤筒，打开滤筒的封盖，弃去上清液；

步骤三、将滤筒上拉至最高位置，打开端盖，向瓶体内加入0.4mL 0.1％甲酸甲醇溶液洗脱，涡旋洗脱，推动滤筒至瓶体底部使上清液进入滤筒，对滤筒内洗脱液进行LC-MS进样分析。

10.根据权利要求9所述的尿液中三苯代谢物的提取方法，其特征在于，所述步骤一中，涡旋提取时间为5-10min；所述步骤三中，涡旋洗脱时间为5-10min。