[发明专利]用于提取净化尿液中三苯代谢物的高分子复合微球、制备方法、试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种用于提取净化尿液中三苯代谢物的高分子复合微球、制备方法、试剂盒及提取方法。本发明所研发的试剂盒基于分散固相萃取技术，将吸附材料分散液移取至分散固相萃取瓶中，并与尿液样品溶液混合，涡旋混匀提取，通过优化提取时间和吸附材料亲水基体与功能单体的比例等参数，能保证提取过程中吸附剂与样品溶液充分接触，进而实现目标分析物的充分吸附，本发明提高了尿液样品处理效果，简化了提取三苯代谢物的操作步骤，具有十分重要的现实意义。

技术领域

本发明涉及生物分析技术领域，尤其涉及一种用于提取净化尿液中三苯代谢物的高分子复合微球、制备方法、试剂盒及提取方法。

背景技术

苯、甲苯和二甲苯(下文简称为三苯)是最具代表性的苯系物，常温下易气化，可通过呼吸和皮肤接触方式进入体内，进而对人体健康构成严重的危害。三苯通过呼吸或皮肤接触方式进入人体后，极易被代谢成其它物质，因此，生物基质中三苯的含量较难检测到，需要通过检测生物样品中特定的生物标志物或代谢物加以评估。尿中反-反式粘糠酸(tt-MA)和苯巯基尿酸(S-PMA)是苯在机体内具有较强特异性和较高敏感性的代谢物，是比较理想的苯接触生物标志物；8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)是活性氧自由基损伤细胞核DNA的鸟嘌呤碱基第8位碳原子而产生的一种氧化性加合物，8-OHdG为常用的职业接触苯效应生物标志物。因此，同时监测尿中tt-MA，S-PMA和8-OHdG的含量能较全面评估人体接触苯的健康风险。苄基巯基尿酸(S-BMA)和马尿酸(HA)是甲苯在人体内的代谢物，可通过监测尿液中S-BMA和HA的含量用以评估人体接触甲苯的健康风险。同样地，尿中3种甲基马尿酸(2-甲基马尿酸(2-MHA)、3-甲基马尿酸(3-MHA)和4-甲基马尿酸(4-MHA))作为二甲苯在人体内的代谢物，可用于评估接触二甲苯的健康风险。

三苯的混合物是常见工业原料，职业工人接触到多种苯系物的情形时有发生，通过对单一某个苯系物代谢物的指标监测难以全面评估人体接触苯系物的健康风险。因此，同时测定尿液样品中8种代谢物(tt-MA、S-PMA、8-OHdG、S-BMA、HA、2-MHA、3-MHA和4-MHA)的含量对于全面评估职业工人接触三苯化合物的健康风险有着重要的科学价值和现实意义。然而，尿液样品中存在着大量无机盐和干扰三苯代谢物检测的杂质，需要选择合适的样品前处理技术才能准确测定。

目前，已有文献和专利报道了尿液样品中三苯代谢物的检测方法，如CN109342633A公开了一种尿液中苯、甲苯和二甲苯代谢物的检测方法，该方法基于液液萃取法，难以除去尿液样品中大量的无机盐，处理净化效果不佳，将会影响检测结果的准确度与重现性，且高浓度无机盐的存在对于液相色谱-质谱仪的损伤较大。又如万玲利等的论文(《职业与健康》，2021，37(8)：1033-1043)建立了基于固相萃取柱净化-超高效液相色谱-高分辨质谱联用技术检测尿液样品中三苯6种代谢物，该论文分别对比了HLB、C18、WAX、MAX和Silica五种固相萃取小柱的净化效果，证明HLB固相萃取小柱效果最佳，但按照论文提供的前处理条件试验发现三苯代谢物的回收率远不及论文中的数据。可能的原因与不足如下：(1)固相萃取柱内吸附剂填充紧密，在尿液样品处理过程中，难以保证样品溶液与柱内吸附剂充分接触，阻碍了目标分析物与吸附剂之间的吸附作用，从而影响了净化效果与准确度；(2)前处理条件的优化不够细致、净化模式选择不当，如论文中采用MAX固相萃取小柱净化时未考虑待测化合物表面存在羧基等易电离成阴离子的结构特点，在弱碱性条件可实现阴离子交换作用力进行吸附与净化以提高方法回收率；(3)商品化的固相萃取柱内吸附剂的配方固化，不能针对某类特定化合物进行个性化设计，从而影响了提取净化效果，如在处理尿液样品中既要考虑目标分析物的结构特点，又要考虑吸附剂与尿液样品基质的相容性，只有兼顾这两方面的因素才能实现高效提取与净化。