[发明专利]一种用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺

权利要求书

1.一种用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺，其特征在于，以外消旋6-氟-色满-2-羧酸甲酯为底物，进行两批次或多批次反应，相邻批次反应交替使用表达EstS的重组大肠杆菌或表达EstR的重组大肠杆菌作为催化剂，在有机相和水相的双相体系中反应；

每批次反应完成后，分离有机相和水相，回收未反应完全底物的有机相用于下一批反应；纯化水相，去除溶剂，获得(S)-6-氟-色满-2-羧酸或(R)-6-氟-色满-2-羧酸；

在每个批次后补充水相，用于下一批次反应；在每两个批次后补充底物6-氟-色满-2-羧酸甲酯，用于下一批次反应；如此循环，实现6-氟色满-2-羧酸甲酯的连续分批拆分。

2.如权利要求1所述的用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺，其特征在于，每批次反应完成后，采用过滤方法去除菌体或回收固定化细胞后，其中，imcEstS或imcEstR用生理盐水洗涤3遍作为下一批次的催化剂。

3.如权利要求1所述的用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺，其特征在于，每批次反应完成后，反应液中加入氢氧化钠溶液调节pH至11-12后，分离有机相和水相，然后在水相中加入盐酸溶液调节pH至1-2，用乙酸乙酯萃取3遍，旋蒸蒸发除去溶剂，得到(S)-6-氟-色满-2-羧酸白色固体或(R)-6-氟-色满-2-羧酸白色固体，未反应完全底物的有机相用于下一批次反应。

4.如权利要求1所述的用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺，其特征在于，所述的双相体系，有机相为甲苯，水相为磷酸缓冲液。

5.如权利要求1所述的用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺，其特征在于，表达EstR的重组大肠杆菌的催化剂为表达EstR的重组大肠杆菌的冻干菌体或固定化表达EstR的重组大肠杆菌细胞；表达EstS的重组大肠杆菌的催化剂为表达EstS的重组大肠杆菌的冻干菌体或固定化表达EstS的重组大肠杆菌细胞。

6.如权利要求1所述的用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺，其特征在于，当使用表达EstS的重组大肠杆菌进行拆分时，反应体系的pH控制在7.0-7.1；当使用表达EstR的重组大肠杆菌进行拆分时，反应体系的pH控制在7.4-7.5。

7.如权利要求1所述的用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺，其特征在于，双水相体系的反应温度为30℃，反应时间为2～40小时。

8.如权利要求1或4所述的用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺，其特征在于，所述有机相的含量的体积百分比为20％-30％。

9.如权利要求1所述的用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺，其特征在于，所述表达EstS的重组大肠杆菌或表达EstR的重组大肠杆菌的浓度为10g/L；外消旋6-氟-色满-2-羧酸甲酯的浓度是100-200mM。

10.如权利要求1-9任一项所述的用于制备光学纯的6-氟-色满-2-羧酸的连续双相分批拆分工艺，其特征在于，分批反应时，先投入表达EstS的重组大肠杆菌进行拆分反应；下一批次反应，再投入表达EstR的重组大肠杆菌进行拆分反应。