[发明专利]一种体外培养TH1细胞的培养液及其应用和TH1细胞的体外培养方法

权利要求书

1.一种体外培养TH1细胞的培养液，其特征在于，所述培养液由A培养液和B培养液组成；

所述A培养液由以下浓度的组分组成：单抗CD3 500~1000 ng/mL、单抗CD28 500 ~1000ng/mL、CpG-A ODN 0.05 ~3 nmol/mL、维生素A 0.5 ~2 μmol/mL、γ-分泌酶抑制剂DAPT 20~100 nmol/mL、大蒜新素50 ~150 ng/mL、肝素10 ~100 IU/mL、IL-18 10 ~50 IU/mL、IL-1250 ~200 IU/mL和IL-2 100 ~1000 IU/mL；

所述B培养液为无血清培养基和有效物质，所述有效物质由以下浓度的组分组成：肝素10 ~100 IU/mL、IL-18 10 ~50 IU/mL、IL-12 50 ~200 IU/mL、IL-2 100 ~1000 IU/mL；

所述无血清培养基为ALyS505N-0。

2.权利要求1所述的培养液在体外培养TH1细胞中的应用。

3.一种TH1细胞的体外培养方法，其特征在于，所述体外培养方法由以下步骤组成：

利用无血清培养基将外周血单个核细胞制成细胞悬液，将细胞悬液与权利要求1所述的A培养液混合得到混合物a开始培养，记为Day 0；

Day 3时将混合物a与权利要求1所述的B培养液混合，得到混合物b；

Day 5时将混合物b与权利要求1所述的B培养液混合，得到混合物c；

Day 7时将混合物c与权利要求1所述的B培养液混合，得到混合物d；

Day 9时从混合物d中收获TH1细胞。

4.根据权利要求3所述的体外培养方法，其特征在于，所述细胞悬液中外周血单个核细胞的细胞密度为（1.0~1.5）×10⁶个/mL。

5.根据权利要求3所述的体外培养方法，其特征在于，所述混合物b、混合物c和混合物d中，细胞的密度≥0.5×10⁶个/mL。

6.根据权利要求3所述的体外培养方法，其特征在于，所述培养的温度为37℃，二氧化碳的浓度为5%。

7.根据权利要求3所述的体外培养方法，其特征在于，所述细胞悬液中外周血单个核细的细胞密度为（1.0~1.5）×10⁶个/mL。

8.权利要求3~7所述的TH1细胞的体外培养方法在快速培养TH1细胞中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述培养方法在Day 9时收获的TH1细胞，TH1细胞的增值倍数为228~235，CD4+ IFN-γ+双阳性的细胞百分比为71.5%~73.4%。