[发明专利]一种鉴定过敏原的方法

说明书

本发明属于过敏原鉴定技术领域，本发明提供了一种鉴定过敏原的方法。本发明用待鉴定样品刺激未成熟的树突细胞，采用流式细胞术检测细胞表面标记物(MHCⅡ、CD86)的表达，采用ELISA法检测细胞因子(IL‑6、IFN‑γ、TNF‑α)的产生情况。同时，根据待鉴定过敏原体外刺激树突细胞后，对T细胞分化的作用来判断待鉴定样品是否为过敏原。本发明方法简单有效，为快速鉴定过敏原提供了可参考的依据。

技术领域

本发明涉及过敏原鉴定技术领域，尤其涉及一种鉴定过敏原的方法。

背景技术

食物过敏是人体免疫系统对部分食品成分产生的不良反应，已经成为全球关注的食品安全问题。超过全世界人口40％的人受到食物过敏的困扰。食物过敏症状包括皮肤瘙痒、呕吐、腹泻等胃肠道症状，严重的会导致休克甚至死亡。随着人民生活水平的提高和国际食品贸易的普及，迫切需要对食物过敏原进行风险评估和机制探索。

在食物引发的致敏过程中，位于免疫系统前端的树突细胞(Dendritic cells,DC)和T细胞的作用是尤为重要的一环。树突细胞因其表面呈星型多形体或树突而得名。它能够摄取抗原，并对抗原进行加工处理后递呈给不同的免疫细胞。因此，DC在细胞免疫和体液免疫的启动和调节中发挥着重要作用。DC是最有效的抗原递呈细胞，对T细胞介导的免疫应答的启动和调控发挥着关键作用：食物过敏原诱导DC细胞活化和成熟的程度，决定了T细胞的激活与分化。目前，常用的过敏原鉴定方法仍主要针对过敏反应的效应细胞(肥大细胞和嗜碱性粒细胞)，完全忽略了DC细胞和T细胞分化对食物过敏反应的影响，目前此阶段的发明研究仍为空白。因此，针对食物过敏启动阶段的研究，如何开发一种有效、快速的鉴定过敏原的方法是至关重要的。

发明内容

为克服现有技术中存在的上述缺陷，本发明提供了一种有效、快速的鉴定过敏原的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种鉴定过敏原的方法，包括如下步骤：

(1)用GM-CSF和IL-4诱导骨髓细胞分化，当树突细胞比例超过90％时，得未成熟的树突细胞；

(2)用待鉴定样品刺激上述所得未成熟的树突细胞45～50h，若树突细胞的MHCⅡ和CD86表达上调6％以上，且树突细胞分泌IL-6的水平上升15％以上，分泌IFN-γ的水平上升4％以上，同时树突细胞分泌TNF-α的水平下降1％以上，则对待鉴定样品进行下一步鉴定，否则说明待鉴定样品不是过敏原；

(3)将通过上述鉴定的刺激完成的树突细胞与T细胞进行共培养，若共培养体系中IL-4的分泌水平与IFN-γ的分泌水平的比例≥0.8，则表示T细胞发生了Th2向偏移，认为待鉴定样品是过敏原，否则说明待鉴定样品不是过敏原。

优选的，所述过敏原包括食物过敏原或非食物过敏原。

优选的，步骤(1)中所述GM-CSF的浓度为18～22ng/mL，所述IL-4的浓度为8～12ng/mL。

优选的，步骤(2)中所述待鉴定样品的浓度为0.05～0.5mg/mL。

优选的，步骤(3)中所述树突细胞与T细胞的个数比为1:8～12，所述T细胞的表面含有CD4⁺分子，所述共培养的时间为45～50h。

本发明的有益效果如下：

本发明用待鉴定样品刺激未成熟的树突细胞，采用流式细胞术检测细胞表面标记物(MHCⅡ、CD86)的表达，采用ELISA法检测细胞因子(IL-6、IFN-γ、TNF-α)的产生情况。同时，根据待鉴定过敏原体外刺激树突细胞后，对T细胞分化的作用来判断待鉴定样品是否为过敏原。本发明方法简单有效，为快速鉴定过敏原提供了可参考的依据。

附图说明

图1为大菱鲆小清蛋白分离纯化及三维结构模拟图；