[发明专利]一种苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养方法

说明书

本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养方法。本发明的液体培养基以水为溶剂，每1L液体培养基中添加有如下成分：玉米淀粉30‑40g，黄豆饼粉35‑45g，玉米浆10‑30g，蛋白胨5‑10g，酵母粉5‑8g，酵母抽提物2‑5g，L‑酪氨酸0.2‑0.5g，硫酸铵0.1‑0.5g，磷酸二氢钾0.3g，硫酸镁0.03g，硫酸锌0.03g，硫酸锰0.02g和氯化钙0.2g。使用本发明的液体培养基培养苏云金芽孢杆菌，可提高发酵液中的芽孢含量，使发酵产物中积累更多的杀虫活性的物质，由此配制的WP制剂对根结线虫具有更高的防效。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及到一种苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养方法。

背景技术

线虫属于线虫动物门(Aschelminthes)，在动物界中占据着较大的数量，主要寄生于动植物，或自由生活于土壤、淡水和海水环境中。线虫入侵植物后会吸收植物体内营养导致植物生长发育不良，而且线虫在代谢过程中也会产生一些分泌物刺激植物的细胞和组织导致植株畸形，造成农产品减产和质量下降。全球每年由线虫危害导致的作物减产约14％，造成的经济损失可达1570亿美元，与昆虫造成的危害相当。目前已知的粮食作物、经济作物、油料作物、果树蔬菜等100多种植物都可发生了植物病原线虫病，其中危害最为严重的植物病原线虫病害是根结线虫和大豆孢囊线虫引起的。目前主要采用化学农药进行线虫防治，存在着药物品种较少，用量大，高毒，抗药性严重，防效不稳定等问题。

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是一种可以产生多类杀虫晶体蛋白的微生物，研究表明Bt制剂可用于防治植物线虫病。由华中农业大学筛选的苏云金芽孢菌株HAN055(CN 108070535 A)具有杀虫晶体蛋白cry6Aa2和Cry55A基因，该菌在发酵过程中还能分泌金属蛋白酶Bmpl和TAA等具有杀线虫活性的物质，由该菌株开发的可湿性粉剂(Wettablepowder，WP)对线虫有一定的防效。

苏云金芽孢杆菌HAN055对线虫具有较好的防治效果，但由其制备的制剂，还存在芽孢水平和生物效价不够高，且常温储存时芽孢不够稳定，影响到产品质量及实现其产业化进度。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明所要解决的技术问题为提高苏云金芽孢菌株的发酵液中的芽孢的产量，发酵产物的杀虫活性及制剂的稳定性。从而，本发明提供了一种苏云金芽孢杆菌的液体培养基及培养方法。

本发明主要是通过以下技术方案解决上述技术问题的。

本发明提供了一种液体培养基，所述液体培养基以水为溶剂，每1L液体培养基中添加有如下成分：

玉米淀粉30-40g，

黄豆饼粉35-45g，

玉米浆10-30g，

蛋白胨5-10g，

酵母粉5-8g，

酵母抽提物2-5g，

L-酪氨酸0.2-0.5g，

硫酸铵0.1-0.5g，

磷酸二氢钾0.3g，

硫酸镁0.03g，

硫酸锌0.03g，

硫酸锰0.02g和

氯化钙0.2g。

在一些实施方案中，每1L液体培养基中添加的玉米淀粉和黄豆饼粉的总量大于等于70g。

在一些实施方案中，每1L液体培养基中添加的所述黄豆饼粉的量为35、40或45g。