[发明专利]一种用于林可链霉基因工程菌的种子培养基及培养发酵生产林可霉素的方法

说明书

本发明公开了一种用于林可链霉基因工程菌的种子培养基及培养发酵生产林可霉素的方法。该种子培养基，按质量浓度，原料包括：玉米浆30～40g/L、黄豆饼粉10～15g/L、淀粉15～25g/L、葡萄糖5～15g/L、硫酸铵1～3g/L、碳酸钙3～5g/L，水余量。本发明从优化培养基种子质量着手，建立适配于林可霉素基因工程菌种子培养基,解决了现有的发酵工艺与基因工程改造的新菌种之间存在的匹配性较低的问题，本发明优化后的种子液进行发酵，在摇瓶水平林可霉素的产量为3.862g/L，比原始培养基(3.009g/L)发酵生产林可霉素产量提高了28％以上。本发明利用优化后的种子液进行发酵，在15L发酵罐水平林可霉素的最高产量为6.56g/L，比原始培养基(5.17g/L)发酵生产林可霉素产量提高了25％以上。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，尤其涉及一种用于林可链霉基因工程菌的种子培养基及培养发酵生产林可霉素的方法。

背景技术

林可霉素由林可酰胺和丙基脯氨酸经缩合反应生成，其作用机制为作用于敏感菌核糖体的50S亚基，阻止肽链的延长，抑制细菌细胞的蛋白质合成从而起抗菌作用。近年来，林可霉素及衍生物进出口总量及总额正逐年上升，鉴于林可霉素具有巨大的药用和经济价值，因此提高林可霉素的产量十分有必要。

目前林可霉素主要通过林可链霉菌发酵产生，获得高产菌株和优化发酵工艺是提高林可霉素产量的两条有效途径。

微生物发酵工艺一般分为菌种制备、种子培养、发酵和下游过程等不同阶段。多数研究人员集中在发酵阶段进行研究，而种子培养的最适组分和生理状态往往被忽视，这可能导致微生物发酵过程中发酵阶段的失败。而且不同菌株有其最适的发酵工艺，现有的发酵工艺与基因工程改造的新菌种的匹配性是亟待解决的关键共性问题。林可霉素发酵过程中，摇瓶水平种子培养基和发酵罐水平一级种子培养基的组分比例一致，优化其种子培养基更便于在工业上的应用。而目前还未有针对林可链霉基因工程菌做过这方面的研究。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种用于林可链霉基因工程菌的种子培养基及培养发酵生产林可霉素的方法，旨在解决现有技术未有针对林可链霉基因工程菌的种子培养基的问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种用于林可链霉基因工程菌的种子培养基，按质量浓度，原料包括：玉米浆30～40g/L、黄豆饼粉10～15g/L、淀粉15～25g/L、葡萄糖5～15g/L、硫酸铵1～3g/L、碳酸钙3～5g/L，水余量。

进一步地，各原料的质量浓度为：玉米浆36.357g/L、黄豆饼粉13.441g/L、淀粉20g/L、葡萄糖10g/L、硫酸铵1.5g/L、碳酸钙4g/L，水余量。

本发明还提供上述种子培养基在林可链霉基因工程菌培养发酵生产林可霉素中的应用。

本发明还提供一种通过林可链霉基因工程菌培养发酵生产林可霉素的方法，包括以下步骤：

将林可链霉基因工程菌在斜面培养基上于30℃温度条件下培养7d，然后将培养得到的孢子接种于如权利要求1或2所述的种子培养基中，于30℃温度条件下振荡培养48h，然后转接至发酵培养基中进行培养发酵。

进一步地，所述斜面培养基，按质量浓度，原料包括：可溶性淀粉20g/L、黄豆饼粉5g/L、氯化钠0.5g/L、硝酸钾1g/L、七水硫酸亚铁0.01g/L、七水硫酸镁1.02g/L、三水磷酸氢二钾0.66g/L、琼脂18g/L、水余量。

进一步地，所述发酵培养基，按质量浓度，原料包括：葡萄糖100g/L、黄豆饼粉20g/L、玉米浆1.5g/L、硝酸钠8g/L、氯化钠5g/L、硫酸铵6g/L、磷酸氢二钾0.3g/L，水余量；

定容后用5mol/L的NaOH溶液调节pH至7.45-7.5，混匀后加入8g/L碳酸钙。

本发明还提供一种通过林可链霉基因工程菌培养发酵生产林可霉素的方法，包括以下步骤：