[发明专利]基于HRP标记蛋白的工作浓度检测方法

权利要求书

1.一种基于HRP标记蛋白的工作浓度检测方法，其特征在于，包括：

步骤a，使用包被缓冲液将抗原稀释至预设浓度后将稀释后抗原分成多组，将各组抗原分别物理吸附于不同的固相载体并在预设静置温度环境下将各组抗原静置预设时长；

步骤b，使用洗涤缓冲液依次洗涤所述步骤a中静置预设时长的多组抗原并在洗涤完成后备用；

步骤c，将HRP标记蛋白分成多组，使用BSA-PBS溶液依次对各组HRP标记蛋白进行稀释以制备多组不同浓度的HRP标记蛋白；

步骤d，依次将所述步骤c中制备的不同浓度的HRP标记蛋白滴入至对应组的所述抗原内以形成标定混合物，将固相载体加热至预设孵育温度以对标定混合物进行孵育并在标定混合物的孵育时长达到预设值时向各组标定混合物所在固相载体内加入底物液，加入完成后实时监测各组固相载体中标定混合物的反应情况，当判定标定混合物反应完成时，使用比色仪依次检测不同组标定混合物的亮度值，根据标定混合物中的HRP标记蛋白浓度和亮度值绘制曲线图并根据曲线图确定HRP标记蛋白的工作浓度；

在所述步骤a中，建立预设抗原浓度矩阵R0和预设组数矩阵n0，对于所述预设抗原浓度矩阵R0，设定R0（R1，R2，R3），其中，R1为第一预设抗原浓度，R2为第二预设抗原浓度，R3为第三预设抗原浓度，R1＜R2＜R3，对于所述预设组数矩阵n0，设定n0（n1，n2，n3），其中，n1为第一预设组数，n2为第二预设组数，n3为第三预设组数，n3＞n2＞n1；

当使用包被缓冲液完成对抗原的稀释时，检测稀释后抗原的浓度R，若R≤R1，则将稀释后抗原分为n1组，若R1＜R≤R2，则将稀释后的抗原分为n2组，若R2＜R≤R3，则将稀释后的抗原分为n3组；

在针对第i组所述标定混合物的反映情况进行监测时，设定i=1，2，3，...n，建立预设反映情况矩阵Qi，设定Qi（Si，fi，Ni，tmaxi），其中，Si为第i组标记蛋白的稀释浓度，fi为针对第i组标定混合物亮度的检测周期，Ni为针对第i组标定混合物亮度的预设判定周期数量，tmaxi为针对第i组标定混合物的最大监测时长；

当针对所述第i组标定混合物的反映情况进行监测时，记录反应总时长并使用比色仪周期性检测该组标定混合物的亮度Li，当反应时长达到fi时，使用比色仪检测检测标定混合物的亮度Li1并在检测完成时重新记录反应时长，当重新记录的反应时长达到fi时，使用比色仪检测检测标定混合物的亮度Li2，重复上述过程以依次检测各周期内标定混合物的亮度；在记录过程中，设定比色仪在第j个监测周期测得的标定混合物亮度为Lij，若比色仪在第j+1个监测周期测得的标定混合物亮度值Lij+1＜Lij，则判定该组标定混合物反应完成并将该组标定混合物的反应亮度记为Lij，若比色仪在第j+1个监测周期测得的标定混合物亮度值Lij+1=Lij，则将判定周期数量N记为2，当比色仪在检测过程中测得该组标定混合物的亮度值为Lij的检测周期数量N=Ni时，判定该组标定混合物反应完成并将该组标定混合物的反应亮度记为Lij；在检测过程中，当监测总时长达到tmaxi时，判定该组标定混合物反应完成并从测得的多个亮度值中选取最大值作为该组标定混合物的亮度值。

2.根据权利要求1所述的基于HRP标记蛋白的工作浓度检测方法，其特征在于，当完成对所述各组含有不同浓度HRP标记蛋白的标定混合物的亮度的判定时，以亮度值为纵坐标，HRP标记蛋白浓度为横坐标，根据针对上述标定混合物的检测结果绘制曲线并计算曲线中各点的斜率，将曲线斜率最大值所处点位代表的HRP标记蛋白浓度确定为HRP标记蛋白的工作浓度。

3.根据权利要求1所述的基于HRP标记蛋白的工作浓度检测方法，其特征在于，当完成对所述抗原的分组时，建立HRP标记蛋白稀释参数矩阵H，设定H（s，D），其中，s为HRP标记蛋白初始稀释浓度，D为HRP标记蛋白浓度稀释梯度，在针对所述各组HRP标记蛋白的浓度的确定时，根据所述抗原的浓度R确定HRP标记蛋白的初始浓度并根据抗原的组数n确定各相邻组HRP标记蛋白之间的浓度梯度。