[发明专利]制备骨髓浓缩细胞的方法及其用于治疗卵巢早衰的用途

权利要求书

1.制备骨髓浓缩细胞的方法，其包括如下步骤：

(1)提供生物样本骨髓穿刺液，使其置于含有抗凝剂的无菌袋中备用；所述抗凝剂为3.2%枸橼酸钠溶液，其中增补添加0.5mg/ml组氨酸和0.1mg/ml磷脂酰胆碱；

(2)取下细胞自动分离系统的输入管上的护帽，将注射器连接到输入管鲁尔锁定接头上，以缓慢而稳定的速度通过血栓过滤器，将抗凝的生物样本骨髓穿刺液转移到一次性无菌分离杯中，沿水平轴摇动混合生物样本骨髓穿刺液；所述细胞自动分离系统是封闭式的PXP分离系统，其由四个部件组成：a)一次性无菌分离杯、b)控制模块、c)用于传输数据的分离底座、d)DataTrak软件处理系统；

(3)将一次性分离杯放入控制模块中，离心前控制模块状态显示为“0”，将分离杯/控制模块组件称重，配平后，放置于可编程的离心机中，并按照如下程序设定离心机的参数：

程序P1：加速9、减速9、相对离心力2000、时间8.5min，

程序P2：加速9、减速9、相对离心力50、时间2min，

程序P3：加速9、减速9、相对离心力500、时间2min，

程序P4：加速9、减速9、相对离心力50、时间1min，

程序P5：加速9、减速9、相对离心力250、时间0.5min，

程序P6：加速9、减速9、相对离心力50、时间1min；

(4)启动离心机进行离心，进程如下：

4a)P1期使生物样本骨髓穿刺液中的细胞通过离心密度分层在一次性分离杯中分为下中上三个组分：红细胞层、细胞浓缩层、血浆层；

4b)P2期使大部分红细胞进入红细胞回收舱；

4c)P3期进一步将处理室中的细胞分层，P4期降低离心力以进一步除去红细胞；

4d)P5期使细胞浓缩层和血浆进一步分层，至P6期降低离心力，使细胞浓缩层通过输送管转移至回收舱室，血浆保留在中央舱室中；

(5)离心完成后，确认控制模块窗口显示“P”即合格状态，从控制模块中取出分离杯，将注射器连接至分离杯与回收舱室连通的输出管上，收集得到骨髓浓缩细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)提供的生物样本骨髓穿刺液的体积为20~200ml。

3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中另外抽取1ml生物样本骨髓穿刺液以备检测。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)所用抗凝剂与生物样本骨髓穿刺液的体积比为1：12。

5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)所用抗凝剂的配制方法为：使枸橼酸钠、组氨酸和磷脂酰胆碱加至适量水中，加热至60°C搅拌使溶解，加水至全量，0.22µm微孔滤膜过滤，121°C热压灭菌，即得。

6.根据权利要求1所述的方法，其还包括以下步骤：(6)使分离杯和控制模块置于分离底座上以传输数据并用DataTrak软件处理系统处理离心过程中所捕获的数据。

7.一种骨髓浓缩细胞，其是通过权利要求1~6任一项所述方法制备得到的。

8.骨髓浓缩细胞在制备用于治疗卵巢早衰的细胞治疗剂中的用途，所述骨髓浓缩细胞是通过权利要求1~6任一项所述方法制备得到的。