[发明专利]制备骨髓浓缩细胞的方法及其用于治疗卵巢早衰的用途

说明书

本发明涉及制备骨髓浓缩细胞的方法及其用于治疗卵巢早衰的用途。制备骨髓浓缩细胞的方法步骤为：(1)提供生物样本骨髓穿刺液，使其置于无菌袋中；(2)取下细胞自动分离系统输入管的护帽，将注射器连接到输入管鲁尔锁定接头上，通过血栓过滤器，将抗凝的生物样本转移到一次性无菌分离杯中，沿水平轴摇动混合样本；(3)将一次性分离杯放入控制模块中，放置于可编程的离心机中，并按照规定程序设定离心机的参数，(5)离心完成后，从控制模块中取出分离杯，将注射器连接至分离杯与回收舱室连通的输出管上，收集得到的骨髓浓缩细胞。本发明方法呈现如说明书所述优良技术效果。

技术领域

本发明属于生物技术和生物医药领域，涉及使用细胞治疗剂治疗卵巢早衰(Premature ovarian failure，POF)的方法。具体地说，本发明涉及从骨髓穿刺液(Bonemarrow aspirate)中快速分离制备骨髓浓缩细胞(Bone marrow aspirate concentrate，骨髓浓缩物，BMAC)的细胞治疗剂，进而使用此种骨髓浓缩细胞治疗早发性卵巢功能不全和卵巢早衰的方法。使用本发明方法可以有效的提高从骨髓穿刺液中分离骨髓浓缩细胞的效率，提供一种安全、高效、简捷获得骨髓浓缩细胞制剂用于治疗卵巢早衰和卵巢功能不全例如早发性卵巢功能不全的方法。通过使用PXP®自动细胞快速处理系统为本发明目的得以实现。

背景技术

卵巢早衰(Premature ovarian failure，POF)，是指由于卵巢功能衰竭，导致女性40岁之前闭经、不孕的现象。POF是一种以闭经、不孕、雌激素缺乏、卵泡减少和促性腺激素增高为特征的疾病，并伴有一系列低雌激素症状如：潮热多汗、面部潮红、性欲低下等，严重影响女性的身心健康。此外，POF的女性，患骨质疏松症、心血管疾病和老年痴呆的风险增加。POF是导致女性不孕的重要原因之一。育龄女性POF的发病率约1-3%，且呈上升和年轻化趋势。

根据欧洲人类生殖与胚胎学学会的指南(ESHRE)，POF的诊断标准：少经或闭经至少4个月，间隔4周以上的两次FSH水平升高40IU/L。卵巢早衰病因不明，可能与遗传和自身免疫性疾病、环境因素以及医源性和特发性情况有关，尚无有效的治疗方法。激素替代疗法(HRT)是POF最常见的治疗方法之一，但效果并不理想，而且已被证明会增加静脉血栓、乳腺癌和卵巢癌的风险。POF除了少经、闭经、不孕等症状，还可出现潮热、多汗、焦虑、抑郁、心悸、失眠等更年期症状，可能加快女性衰老，导致骨质疏松、心血管疾病、痴呆症等绝经后疾病，影响女性生活质量和寿命。

POF病因复杂，尚未完全阐明，可能与自身免疫应答、感染、遗传因素、化疗、放疗、手术等治疗效果及内分泌功能障碍有关，尚无有效的治疗方法。目前，POF的最常用的治疗方法是激素替代疗法(hormone replacement therapy，HRT)。该疗法虽然对POF的临床症状具有一定的缓解作用，然而，HRT不能从根本上修复受损的卵巢，恢复卵巢功能。此外，研究表明，长期HRT治疗增加心脏病和中风的风险，可能会增加乳腺癌和卵巢癌的风险。因此，需要新的治疗策略来恢复POF患者的卵巢功能。

骨髓(bone marrow)是人体主要的造血器官，由造血细胞、脂肪组织和基质细胞组成。骨髓中的造血干细胞(Hematopoietic stem cells，HSCs)，可以分化为血液循环中的红细胞、白细胞和血小板。骨髓中的间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSCs)是一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群，MSCs通过旁分泌多种生长因子，对HSCs起到支持的作用，维持骨髓造血微环境的稳定。