[发明专利]一种用于果蔬样品中农药残留的快速检测方法

权利要求书

1.一种用于果蔬样品中农药残留的快速检测方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)提取工具酶；所述工具酶为从蚯蚓血清和鸭血血清中提取的粗酶液的混合物；

(2)对工具酶进行固定；

(3)将工具酶装柱；

(4)对果蔬样品农药残留进行检测。

2.根据权利要求1所述的一种用于果蔬样品中农药残留的快速检测方法，其特征在于：所述工具酶由蚯蚓血清粗酶提取液和鸭血血清粗酶液按照1：2的体积比例混合而成。

3.根据权利要求2所述的一种用于果蔬样品中农药残留的快速检测方法，其特征在于所述的蚯蚓血清粗酶液的提取方法如下：

(A1)将蚯蚓洗净后放入清水中12-24h，排净其体内粪便；

(A2)向蚯蚓中加入磷酸缓冲液并制成匀浆液，离心后弃去上清液，得到粗酶提取液；其中每g蚯蚓加入的磷酸缓冲液的体积为1mL；

(A3)步骤(A2)所得的粗酶提取液，再加入表面活性剂Triton X-114和缓冲溶液，并用无菌水稀释至体积为粗酶提取液的10倍；

(A4)离心，分层后将上层溶液倾倒出去，下层溶液即为蚯蚓血清粗酶提取液。

4.根据权利要求3所述的一种用于果蔬样品中农药残留的快速检测方法，其特征在于所述步骤(A3)中，表面活性剂Triton X-114、缓冲溶液相对于步骤(A2)所得的粗酶提取液的加入量为粗酶提取液体积的一半；表面活性剂Triton X-114与缓冲溶液的体积比为1:2-1:3。

5.根据权利要求2所述的一种用于果蔬样品中农药残留的快速检测方法，其特征在于所述的鸭血血清粗酶液的提取方法如下：

(B1)将加有1％柠檬酸钠的抗凝鸭血进行离心，除去红细胞；

(B2)加入等体积的0.2mol/L pH 7.2的PB，加入(NH₄)₂SO₄调至0.25个饱和度；

(B3)4℃静置12h，离心得上清液，再以(NH₄)₂SO₄将上清液调至0.6个饱和度；

(B4)4℃静置12h，抽滤得滤饼，用PBS溶解即为粗酶液，其中PBS的质量用量为滤饼质量的1-2倍。

6.根据权利要求5所述的一种用于果蔬样品中农药残留的快速检测方法，其特征在于所述的步骤(B1)的离心转速5000r/min，离心时间为15min。

7.据权利要求1所述的一种用于果蔬样品中农药残留的快速检测方法，其特征在于：所述步骤(2)对工具酶进行固定，具体为：按4ml/g的比例，将工具酶与酸碱处理过的树脂混合，在摇床上以180rpm/min的速度振荡固定4-6小时后得到固定化酶树脂与酶液混合物，将固定化酶树脂与酶液分开；按固定化酶树脂：液体＝1g:10ml的比例，用去离子水对以上固定化酶树脂进行洗涤，最后将固定化酶树脂浸在蒸馏水中，4℃贮存备用。

8.据权利要求1所述的一种用于果蔬样品中农药残留的快速检测方法，其特征在于：所述步骤(3)将工具酶装柱，具体为：将固定化酶树脂离心脱水，置于pH 6.4缓冲液，使缓冲液充分浸润固定化酶树脂，然后将上述混合物装入柱子，得到工具酶柱。

9.据权利要求1所述的一种用于果蔬样品中农药残留的快速检测方法，其特征在于：所述步骤(4)对果蔬样品农药残留进行检测，具体为：设置参比酶柱，所述的参比酶柱使用的酶为乙酰胆碱酯酶，通过检测工具酶柱和参比酶柱出口液体的温度差和标定，获知样液中的农药残留高低。