[发明专利]一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针及试剂盒

说明书

本发明提供一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针。所述的引物包括上游引物和下游引物，其特征在于：所述的上游引物的序列为5’‑ACGCCAACAACGGACCACAT‑3’，或与其具有至少80％同源性的序列；所述的下游引物的序列为5’‑TAGTCGCGATGCTGCTGACG‑3’，或与其具有至少80％同源性的序列；所述的探针的序列为5’‑GCGTTTGGATCTGCGCCGTG‑3’，或与其具有至少80％同源性的序列。采用本发明的引物探针进行荧光定量PCR检测牛痘病毒，具有简单快速、检测灵敏度高、准确性好、特异性强、收率高、重复性好等优点。

技术领域

本发明涉及生物试剂盒技术领域，尤其涉及一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针及试剂盒。

背景技术

在生物制品的生产过程中，需要使用特定方法去除或灭活部分病毒活性，从而保证该生物制备在临床使用中的安全性。为了检测病毒去除或灭活效果，需要使用一些检测方法对生物制品进行检测。痘病毒作为生物制品病毒安全性评价的一个重要指标，其标志病毒牛痘病毒的快速检测成为安全性评价中的重要环节。常规的生物制品安全评价方法中，多使用传统检测方法，例如细胞实验、动物抗体产生实验，存在操作复杂、耗时长、误差大以及成本高等问题，严重限制生物制品的生产推广。荧光定量PCR技术能够缩短实验周期，减少污染物，并且具有高灵敏度以及高特异性等优势从而渐渐推广开来，但是针对具体病毒，荧光定量PCR的实时准确的检测效果是建立在所选取的引物和探针的基础上的，因此，用于检测牛痘病毒的引物和探针成为研究的重点。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够简单、快速地检测牛痘病毒的引物、探针及试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，所述的引物包括上游引物和下游引物，所述的上游引物的序列为5’-ACGCCAACAACGGACCACAT-3’，或与其具有至少80％同源性的序列，优选具有至少85％的同源性，进一步优选具有至少90％的同源性，更优选具有至少95％的同源性；

所述的下游引物的序列为5’-TAGTCGCGATGCTGCTGACG-3’，或与其具有至少80％同源性的序列，优选具有至少85％的同源性，进一步优选具有至少90％的同源性，更优选具有至少95％的同源性；

所述的探针的序列为5’-GCGTTTGGATCTGCGCCGTG-3’，或与其具有至少80％同源性的序列，优选具有至少85％的同源性，进一步优选具有至少90％的同源性，更优选具有至少95％的同源性。

优选地，所述的引物扩增片段大小为180～185bp。

优选地，所述的上游引物的长度、所述的下游引物的长度和所述的探针的长度独立地为18～22bp，进一步优选为19～21bp。

优选地，所述的上游引物的GC含量为50～60％，进一步优选为52～58％，更进一步优选为54～56％。

优选地，所述的下游引物的GC含量为55～65％，进一步优选为58～64％，更进一步优选为59～61％。

优选地，所述的探针的GC含量为60～70％，进一步优选为62～68％，更进一步优选为64～66％。

优选地，所述的探针的5’端连接有荧光报告基团，所述的探针的3’连接有荧光淬灭基团。

优选地，所述的荧光报告基团为FAM；所述的荧光淬灭基团为TAMRA或BHQ。

一种快速鉴别牛痘病毒的试剂盒，所述的试剂盒包括所述的引物、探针。