[发明专利]一种生物样本液体活检样本的处理方法（磁珠分离法）及其应用

说明书

本发明一种生物样本液体活检样本的处理方法(磁珠分离法)及其应用，涉及质谱法、光谱法测定用液体活检样本中蛋白、多肽以及代谢产物的前处理方法。通过使用经过表面修饰的固相萃取磁珠，对液体活检样本中待检测物质进行吸附结合，再使用洗脱溶液对这种强烈的结合进行破坏，以获得分离富集的待测物质，可用于质谱、色谱、光谱等检测用仪器对慢性疾病的辅助诊断。

技术领域

本发明涉及液体活检样本的前处理方法，具体涉及分子诊断技术对疾病检测用液体活检样本的处理方法。

背景技术

随着分析仪器技术的发展以及人工智能技术的日益成熟，体外诊断技术（introdiagnostic）已成为人类疾病预防、诊断及治疗的重要组成部分，也为人类健康及社会和谐提供了重要保障，其中分子诊断技术更是具有极大的潜力，也是诊断技术未来发展的关键方向。

血液、尿液、淋巴液、组织液等生物液体活检样本中的蛋白、多肽和代谢产物有可能作为从正常状态到疾病状态进展的可靠指标。分子诊断技术主要包括使用质谱、光谱、色谱等检测仪器，对生物液体活检样本中的蛋白、多肽以及代谢产物等物质含量的分析检测，能够精准地对肿瘤、高血压、冠心病等慢性疾病的患病情况进行诊断，并对临床寻找慢性疾病的患病原因具有极大的帮助。

生物液体活检样本中盐、脂质和高浓度蛋白质的存在会对仪器的分析产生不利影响，因为所有这些部分都会阻碍诊断生物标志物的检测。传统多级分馏方法中的几种使用色谱柱吸附剂的预分馏策略已被用于对样品进行脱盐并去除丰富的蛋白质，但存在柱子层析介质制备复杂、价格昂贵以及不适用于大规模临床使用等缺陷，本发明在实验过程中，经过不断优化实验步骤及试剂比例，达到了富集和纯化蛋白、多肽、代谢产物等目标物质的目的，并极大地提高了分离效果和重现性，降低了制造成本，更加适用于高通量和临床环境，从而更适用于精确的疾病筛查。

现有技术文献

非专利文献

Serum Peptide Profifi ling using MALDI Mass Spectrometry .，PracticalProteomics (2007) 1:77。

发明内容

发明要解决的技术问题

分子诊断技术使用的液体活检样本中存在大量的盐类、基因碎片、脂类、大分子蛋白质及细胞碎片，对仪器检测产生严重的干扰。传统的解决方法主要是在血清、尿液等液体活检样本中加入甲醇、乙醇、乙腈、丙酮等有机溶剂，使高丰度蛋白变性而聚集沉淀并通过离心进行分离，获得含有蛋白、多肽、代谢产物等待检测物质的上清液。但该方法存在干扰物质分离不彻底、干扰检测结果等缺点。

解决问题的手段

为了解决上述问题，本发明提供一种色谱法、光谱法及质谱法测定液体活检样本中蛋白、多肽以及代谢产物的前处理方法，建立一种准确性良好的、样品消耗量低的、高通量检测的一种的非侵袭性诊断疾病的方法，大大降低了样本中干扰物质的浓度，提高了诊断的准确率。本方法通过使用经过表面修饰的固相萃取磁珠，对样本中的蛋白、多肽、代谢产物等待检测物质进行吸附结合，再使用洗脱溶液对这种强烈的结合进行破坏，以获得分离富集的待测物质，后续通过检测仪器对洗脱液进行检测，可以筛查出包括肿瘤、冠心病、高血压、糖尿病等慢性疾病。

具体而言，本发明包含以下实施方式。

1、一种样本处理方法，其包括下述步骤：

步骤一、将磁珠混合摇匀；

步骤二、将样本进行酸化；

步骤三、将磁珠进行磁性分离；

步骤四、将磁珠润湿；

步骤五、使步骤四的润湿的磁珠吸附步骤二的酸化样本；

步骤六、使用冲洗液冲洗步骤五的磁珠；

步骤七、使用洗脱液冲洗步骤六的磁珠；

步骤八、收集洗脱液，使用仪器进行检测。