[发明专利]一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法

权利要求书

1.一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)UPB样品的离心与沉淀收集；2)戊二醛和锇酸双重固定；3)醋酸双氧铀染色；4)丙酮脱水和梯度树脂渗透；5)样品聚合处理；6)切片和染色；7)透射电镜检测。

2.如权利要求1所述的一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

1).取UPB样品，离心，弃上清收集沉淀；

2).沉淀用戊二醛固定过夜，然后去除戊二醛固定液，加入琼脂进行预包埋，PBS清洗；然后用锇酸后固定；

3).水洗后用醋酸双氧铀染色，再用水清洗；

4).分别使用70％，95％，100％丙酮脱水和过度处理；

5).使用体积比为丙酮：环氧树脂＝1:1进行渗透，然后用纯树脂渗透；

6).样本纯树脂包埋后，60℃聚合处理过夜；

7).超薄切片70-100nm，铜网收集承载切片；

8).使用质量浓度为3％柠檬酸铅染色；

9).烤干并收集切片，在透射电镜中观察10个铜网孔，计数其中病毒颗粒的数目,然后计算原UPB中病毒浓度。

3.如权利要求1或2所述的一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法，其特征在于，1)中样品离心条件为：100000g，2h。

4.如权利要求1或2所述的一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法，其特征在于，2)中戊二醛体积浓度为5％，琼脂质量浓度为3％，锇酸质量浓度为1％。

5.如权利要求1或2所述的一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法，其特征在于，3)中醋酸双氧铀的体积浓度为3％。

6.如权利要求1或2所述的一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法，其特征在于，5)中纯树脂渗透2h。

7.如权利要求1或2所述的一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法，其特征在于，6)中60℃聚合至少10h。