[发明专利]一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法

说明书

本发明公开了一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法，包括以下步骤:1)UPB样品的离心与沉淀收集；2)戊二醛和锇酸双重固定；3)醋酸铀块染；4)丙酮脱水和梯度树脂渗透；5)样品聚合处理；6)切片和染色；7)透射电镜检测；本发明根据UPB样品特性，结合超薄切片透射电镜技术原理，扩展了超薄切片电镜技术检测病毒的能力，使利用超薄切片电镜技术在UPB中检测病毒成为了可能。超薄切片电镜技术在UPB中检测病毒，相比传统的在细胞中检测病毒的方法，可广泛地应用于生物制品或者医疗健康领域的检测，以及对生物制品的生物安全性检测。

技术领域

本发明涉及一种病毒的检测方法，具体涉及一种用超薄切片电镜技术检测病毒的方法。

背景技术

生物制品主要是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗或诊断的产品。人用的生物制品包括：细菌类疫苗(含类毒素)、病毒类疫苗、抗毒素及抗血清、血液制品、细胞因子、生长因子、酶、体内及体外诊断制品，以及其他生物活性制剂，如毒素、抗原、变态反应原、单克隆抗体、抗原抗体复合物、免疫调节及微生态制剂等。由于生物医药产品大多通过细胞、细菌等生物体制造的特性，在其生产的过程中可能会存在一些微生物、病毒或蛋白质等物质的残留污染，这些污染可能会使产品的安全性存在一定的挑战。为确保产品的一致性和安全性，一般需要建立细胞库，并对建库的细胞进行检测，检测的项目一般包括鉴别，微生物污染检测、内外源病毒因子检测、逆转录病毒检测及特异性病毒检测等。虽然对建库细胞进行了内外源病毒因子检测，但有些病毒在细胞库中未检出或者在生产过程中引入偶然的病毒污染，故而对细胞收获液(UPB)中的病毒进行检测进而对其控制显得非常重要。

另外，医疗健康领域也需要进行病毒检测。病毒性感染可由多种病毒引起，但临床表现均有畏寒、发热、全身倦怠无力、食欲减退等全身中毒症状及受侵组织器官炎症的表现。人体的病毒性感染分为隐性感染、显性感染、慢病毒感染。多数情况下的感染呈隐性感染。少数为显性感染。显性感染中多数病毒性感染表现为急性感染，发病急、病程短，多在1～2周内自愈，少数表现为潜伏性感染(如疱疹病毒感染等)和慢性感染(如乙型肝炎病毒感染等)。在进行相关的诊断时，需要进行实验室检查。应用电镜等可直接检查标本中的病毒颗粒及病毒抗原，常用作快速和早期诊断。

电子显微镜在病毒学研究中发挥着重要作用，尤其是在病毒粒子的鉴定、形态学研究和病毒检测等方面，超薄切片透射电镜技术更是一种最为直接和有效的方式来检测病毒颗粒的存在。无论是从病毒形态学和病毒发生学上，都能通过超薄切片电镜技术获得清晰和准确的结果。但传统的超薄切片电镜技术只能在细胞样品中检测，这使得超薄切片电镜技术无法在竞争剧烈的制药领域内得到更好的应用。本发明可以拓展超薄切片电镜技术对不同样品类型的应用范围，并丰富UPB中病毒颗粒的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于，解决上述现有技术的不足，提供一种使用超薄切片电镜技术检测UPB样品中病毒的方法，以实现UPB样品中病毒的准确及高特异性检测。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种使用超薄切片电镜技术检测UPB中病毒的方法，包括以下步骤：

1)UPB样品的离心与沉淀收集；

2)戊二醛和锇酸双重固定；

3)醋酸铀块染；

4)丙酮脱水和梯度树脂渗透；

5)样品聚合处理；

6)切片和染色；

7)透射电镜检测。

进一步的，所述方法包括以下具体步骤：

步骤1：取UPB样品，离心，弃上清收集沉淀；