[发明专利]一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法

权利要求书

1.一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，包括中和试剂，其特征在于：所述将中和试剂、酸解后的系统适用性样品或待测样品、Biotin-Drug与Ru-Drug混合液(含有高浓度VEGFR1或药物)分别加入到非吸附96孔板中，室温振荡孵育后，形成“Biotin-Drug～ADA～Drug-Ru″复合物(Drug～ADA～Drug)；将Drug～ADA～Drg复合物转入封闭完成的MSDStreptavidin 96孔板并于室温振荡孵育，洗板后加入MSD Read BufferT(2x)，于MSDQUICKPLEX SQ120上读取仪器信号，仪器信号(ECLU)的大小与ADA浓度成正比。阳性对照样品用100％正常健康人血浆配制。

2.根据权利要求1所述的一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，其特征在于：所述1个分析板指2套阴性、阳性系统适用性样品(含或不含未知样品)在同一微孔板上的分析过程。所述若无特殊说明，所有的缓冲液以及工作液入孔前需平衡至室温。

3.根据权利要求1所述的一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，其特征在于：所述Master Mix工作液配制(韭免疫抑制确认试验样品的捕获/检测试剂工作液配制采用筛选稀释液I进行稀释，免疫抑制确认试验样品的捕获检测试剂工作液配制采用确认稀释液II进行稀释。

4.根据权利要求1所述的一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，其特征在于：所述Master Mix工作液的配制步骤；

1、将中和试剂内加入稀释液I进行混合配制；

2、将捕获试剂工作液与检测试剂工作液按体积比1∶1混合成Master Mix工作液。

5.根据权利要求1所述的一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，其特征在于：所述将待处理样品用300mM HAc以1∶50稀释后于室温静置10～30min进行酸解。

6.根据权利要求1所述的一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，其特征在于：所述样品孵育步骤；

1、将配制好的MasterMix工作液加入圆孔聚丙烯板中，90μL/孔；

2、将中和试剂(IM Tris，pH9.5)加入圆孔聚丙烯板中，20μL/孔；

3、最后将酸解处理完成的样品加入圆孔聚丙烯板中，50μL/孔，单孔/样品，封板后于室温避光振荡(600RPM)孵育2～2.5hrs；

4、MSD SA Plate封闭：将3％BlockA加入微孔板中，150μuL/孔，封板后于室温避光振荡；孵育至少30min。

7.根据权利要求1所述的一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，其特征在于：所述洗板步骤：取出MSD SA Plate，用洗板液以不少于300μL/孔洗板3次，并于纸巾上拍干板孔。

8.根据权利要求1所述的一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，其特征在于：所述将孵育后的样品转入MSD SAFlate中，50μL/孔，复孔/样品；封板后于室温避光振荡(600RPM)孵育1.0～1.5hrs。

9.根据权利要求1所述的一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，其特征在于：所述将配制好的MSD Read Buffer(2x)工作液加入MSD SAPlate中，150μuL/孔，15min内将MSD SAPlate放入MSD QuickPlex SQ120中进行检测。