[发明专利]一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法

说明书

本发明涉及药物检测技术领域，且公开了一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，包括中和试剂，所述将中和试剂、酸解后的系统适用性样品或待测样品、Biotin‑Drug与Ru‑Drug混合液(含有高浓度VEGFR1或药物)分别加入到非吸附96孔板中，室温振荡孵育后，形成“Biotin‑Drug～ADA～Drug‑Ru″复合物(Drug～ADA～Drug)；将Drug～ADA～Drg复合物转入封闭完成的MSD Streptavidin 96孔板并于室温振荡孵育，洗板后加入MSD Read BufferT(2x)，于MSD QUICKPLEX SQ120上读取仪器信号，仪器信号(ECLU)的大小与ADA浓度成正比。阳性对照样品用100％正常健康人血浆配制。该检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，该方法可以很好地解决内源性VEGF干扰对贝伐珠单抗免疫原性检测的影响，优势包括：采用磁珠包被去除试剂的方法模式，包被效果高。

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，具体为一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法。

背景技术

在贝伐珠单抗类药物抗药性抗体检测过程中，面临的1个主要挑战就是靶点分子(VEGF)的干扰。尽管给药前VEGF浓度不会显著影响ADA检测，但给药后，一方面由于药物迅速和血液中可溶性的VEGF结合，导致血液中游离的VEGF水平迅速降低，进而引发内在负反馈机制导致VEGF分泌增多；另一方面VEGF与药物结合导致清除显著减慢，从而导致总的VEGF水平显著升高。在ADA检测过程中需要采用酸解等方式将ADA-药物复合物解离开，形成游离的ADA以便于检测，但该过程的同时也会释放药物结合的VEGF分子，造成样品中的游离的VEGF水平显著升高，VEGF往往是以二聚体的形式存在，可以直接与捕获试剂和检测试剂桥连而出现假阳性信号。

现有解决上述问题的技术方法主要是采用抗VEGF的抗体来进行干扰的解除。但该技术存在较大的技术缺陷和不足。首先，由于采用去除的试剂是针对VEGF的抗体，而药物贝伐珠单抗也是针对VEGF的抗体，在方法学研究中需要设置阳性对照(抗贝伐珠单抗的抗体)，而阳性对照有可能与去除VEGF的抗体产生交叉反应，从而降低阳性对照的信号，导致假阴性结果产生的可能性；其次，一般涉及去除VEGF的单抗试剂的反应性也仅仅接近贝伐珠单抗与VEGF的亲和力，而给药后的贝伐珠单抗的浓度水平给药，从而导致需要加入大量的去除抗体试剂，而且效果也不太理想。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，解决了上述背景技术中提出的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明提供如下技术方案：一种检测贝伐珠单抗抗药性抗体的新型分析方法，包括中和试剂，所述将中和试剂、酸解后的系统适用性样品或待测样品、Biotin-Drug与Ru-Drug混合液(含有高浓度VEGFR1或药物)分别加入到非吸附96孔板中，室温振荡孵育后，形成“Biotin-Drug～ADA～Drug-Ru”复合物(Drug～ADA～Drug)；将Drug～ADA～Drg复合物转入封闭完成的MSD Streptavidin 96孔板并于室温振荡孵育，洗板后加入MSD Read BufferT(2x)，于MSD QUICKPLEX SQ120上读取仪器信号，仪器信号(ECLU)的大小与ADA浓度成正比。阳性对照样品用100％正常健康人血浆配制。

优选的，所述1个分析板指2套阴性、阳性系统适用性样品(含或不含未知样品)在同一微孔板上的分析过程。所述若无特殊说明，所有的缓冲液以及工作液入孔前需平衡至室温。

优选的，所述Master Mix工作液配制(韭免疫抑制确认试验样品的捕获/检测试剂工作液配制采用筛选稀释液I进行稀释，免疫抑制确认试验样品的捕获检测试剂工作液配制采用确认稀释液II进行稀释。

优选的，所述Master Mix工作液的配制步骤；