[发明专利]一种MRC-5细胞复苏培养液以及复苏方法

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种MRC‑5细胞复苏培养液，包括如下体积份的组分：基础培养基，6.5‑7.7体积份；质量体积比7.5%碳酸氢钠，0.2‑0.3体积份；质量体积比3%必需氨基酸，0.1‑0.2体积份；胎牛血清，2‑3体积份；上述MRC‑5细胞复苏培养液可以显著降低保存液中的DMSO对MRC‑5细胞的毒性影响，可以将通过含有DMSO冻存液冻存的MRC‑5细胞融化后直接接种至MRC‑5细胞复苏培养液培养，省略了离心处理步骤，避免细胞污染，节约时间成本，且细胞贴壁率高于传统细胞复苏方法的细胞贴壁率，细胞质量高，利于后续细胞扩增。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种MRC-5细胞复苏培养液以及复苏方法。

背景技术

细胞冷冻作为一种保存细胞的有效方法在生物学领域已深入广泛的应用。研究人员经常需要冷冻细胞并保存，以供后续实验或临床使用。传统的低温冷冻保存技术是将二甲基亚砜(DMSO)和血清中加入细胞混悬液后放入冻存管中，于-80℃冰箱慢慢冷冻后，将冻存管置于液氮中保存，使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，需要时快速解冻。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄增、交换和运输某些细胞。

细胞冻存时加入保护剂终浓度5％-15％的DMSO，可使溶液冰点降低，在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。采用″慢冻快融″的方法能较好地保证细胞存活。然而复苏过程中冻存液里的DMSO和复苏后细胞培养基里的残留DMSO往往对细胞会有一定的毒性作用，抑制细胞增殖，影响复苏后细胞的活性和后续试验的开展。

为降低DMSO对细胞的毒性，传统的细胞冻存后复苏，均采用细胞融化后离心沉淀细胞去除上清冻存液，再进行接种培养基进行培养。申请人研究中发现，离心过程中容易造成细胞冻存管破裂，从而造成细胞污染，影响细胞扩增。因细胞复苏后在有抗生素的培养基里贴壁生长，如果菌含量不高细胞连续传几代也未必能发现细菌污染，只有在换成无抗生素培养液里才能发现有无细菌污染。这个过程需要20-30天，从而影响整个生产或研发进度。另外，离心处理这一步操作，在操作过程中也是造成细胞污染的一个关键点。然而基于离心去除冻存剂简单易操作，能显著降低DMSO的含量，以及从离心处理后到发现细菌污染已经经过许多处理步骤并不容易将细菌污染直接归因于离心处理步骤等原因，目前还未有尝试取代离心处理步骤进行细胞复苏的相关研究和报道。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种人胚肺成纤维细胞（MRC-5细胞）复苏培养液以及复苏方法，可以将通过含有DMSO冻存液冻存的MRC-5细胞融化后直接接种至MRC-5细胞复苏培养液培养，省略了离心处理步骤，避免细胞污染，节约时间成本，且细胞贴壁率高于传统细胞复苏方法的细胞贴壁率，细胞质量高。

为此，本发明提供了如下的技术方案：

本发明提供了一种MRC-5细胞复苏培养液，包括如下体积份的组分：

基础培养基，6.5-7.7体积份；

质量体积比7.5%碳酸氢钠，0.2-0.3体积份；

质量体积比3%必需氨基酸，0.1-0.2体积份；

胎牛血清，2-3体积份。

可选的，所述的MRC-5细胞复苏培养液，包括如下体积份的组分：

基础培养基，7.7体积份；

质量体积比7.5%碳酸氢钠，0.2体积份；

质量体积比3%必需氨基酸，0.1体积份；

胎牛血清，2体积份。

可选的，所述基础培养基包括日水培养基、DMEM培养基或MEM培养基；或