[发明专利]一种生物分子或细胞富集筛网的冻干保护方法及冻干保护液

说明书

本发明公开了一种生物分子或细胞富集筛网的冻干保护方法及冻干保护液。一种生物分子或细胞富集筛网的冻干保护方法，所述生物分子或细胞富集筛网包括筛网骨架、覆于所述筛网骨架上的高分子层及包被与所述高分子层上的能够目标生物分子活细胞特异性结合的抗体，包括如下步骤：将包被有高分子层的筛网置于冻干保护液中，所述冻干保护液浸没所述筛网，其中，所述冻干保护液包括赋形剂、增稠剂及防腐剂，其中，所述赋形剂包括重量比为4～6∶1～3∶2～3的糖类、甘露醇和山梨醇；冻干保存，使筛网被包裹在由所述冻干保护液形成的冻干粉中。本发明冻干后的富集筛网无致密糖壳，具有较优的复溶性。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种生物分子或细胞富集筛网的冻干保护方法及冻干保护液。

背景技术

目前，微流控技术已应用于CTC细胞(循环肿瘤细胞)分选富集，其中富集芯片是重要的组成元件，其中的一种富集芯片为包被有能够和目标分子或细胞特异性结合的抗体的网状芯片。江苏汇先医药技术有限公司的CytoBot2000仪所使用的的一次性耗材TIP头即内置这种网状芯片，网状芯片表面结合有高分子涂层及低浓度的捕获抗体，这些组分的化学稳定性及结构稳定性较差，在大规模生产贮存过程中需要对其进行基于冻干工艺的保护。然而在冻干过程中，网状芯片及其表面高分子涂层及蛋白组分易收到物理形变，致使其表面包被的高分子及捕获抗体脱落或捕获抗体活性受损。为保证网状芯片结合的高分子涂层及捕获抗体的结构及活性稳定，在网状芯片冻干过程中袭用传统蛋白组分的冻干保护剂配方(即高浓度的塑型剂蔗糖+渗透压维持剂Tris-甘氨酸缓冲液)，但该款冻干保护剂在小规模的研发生产中遇到了以下问题：1)塑型剂蔗糖浓度过高，冻干后形成致密糖壳；2)冻干后的芯片暴露在空气中组装易吸水潮解形成高粘度的烫液；3)芯片在后续使用的复溶过程中糖液难以清洗，导致下游应用结果判读受阻。综合上述问题基于该款冻干保护剂的网状芯片在冻干后的组装生产，及后续使用的复溶过程中均面临巨大挑战。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种生物分子或细胞富集筛网的冻干保护方法，冻干后的富集筛网无致密糖壳，具有较优的复溶性。

本发明的另一目的是提供一种冻干保护液，其适于对生物分子或细胞富集筛网进行冻干保护，且冻干后为粉状干物质，具有较好的崩解性，进而复溶性较好。

根据本发明的一个方面，一种生物分子或细胞富集筛网的冻干保护方法，所述生物分子或细胞富集筛网包括筛网骨架、覆于所述筛网骨架上的高分子层及包被与所述高分子层上的能够目标生物分子活细胞特异性结合的抗体，包括如下步骤：

将包被有高分子层的筛网置于冻干保护液中，所述冻干保护液浸没所述筛网，其中，所述冻干保护液包括赋形剂、增稠剂及防腐剂，其中，所述赋形剂包括重量比为4～6∶1～3∶2～3的糖类、甘露醇和山梨醇；

冻干保存，使筛网被包裹在由所述冻干保护液形成的冻干粉中。

在一实施例中，所述糖类、甘露醇和山梨醇的重量比为5～6∶1～2∶3。优选地，甘露醇和山梨醇的重量比为3∶2。更优选地，糖类重量与甘露醇和山梨醇的重量之和的比大致为1∶1。进一步地，所述糖类、甘露醇和山梨醇的重量比为5∶3∶2。

在一实施例中，所述糖类包括选自蔗糖、果糖、乳糖、半乳糖、海藻糖或葡萄糖中的一种或多种的组合。

在一实施例中，所述增稠剂包括聚乙烯吡咯烷酮。优选地，所述增稠剂为PVP-K30。进一步地，增稠剂和助溶剂溶解于无菌水中配制为重量浓度为1～3％的增稠剂溶液，备用。其中，助溶剂为吐温80。更进一步地，该增稠剂在冻干保护液中的体积百分比为5～15％。

在一实施例中，所述防腐剂包括硫柳汞和/或叠氮钠。优选地，所述防腐剂为硫柳汞。进一步地，防腐剂溶解液于水中配制为重量浓度为0.01～0.1％的防腐剂溶液，备用。

在一实施例中，所述糖类、所述甘露醇和所述山梨醇分别溶解于PBS缓冲液中，PBS缓冲液的pH值为7.0～7.4。