[发明专利]人胶质母细胞瘤细胞系GWH04及其培养方法与应用

说明书

本发明公开了一种人胶质母细胞瘤细胞系GWH04及其培养方法与应用，属于神经肿瘤细胞系技术领域。它包括从一位右侧颞叶占位胶质母细胞瘤患者的肿瘤组织中培养得到保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏号CCTCC NO.C202163的人胶质母细胞瘤细胞系GWH04。该新胶质母细胞瘤细胞系能够在体外稳定传代培养、裸鼠成瘤性好，可用于研究胶质瘤发生机理、耐药机理或筛选治疗药物等。

技术领域

本发明涉及一种人胶质母细胞瘤细胞，属于神经细胞系技术领域，具体地涉及一种人胶质母细胞瘤细胞系GWH04及其培养方法与应用。

背景技术

胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤，约占所有颅内肿瘤的26.6％，其中胶质母细胞瘤(WHO IV级)占所有胶质瘤的56.1％，占所有颅内恶性肿瘤的47.1％，中位生存时间约14～16.6个月，通过手术、放疗和化疗等多种治疗仅有约5.5％的患者存活达到5年。即使预后相对较好的低级别胶质瘤(WHO II级)也不可避免地会复发进展为高级别胶质瘤(WHO III级和IV级)并最终吞噬病人的生命。关于胶质母细胞瘤的治疗，以手术为主，即便术后辅助同步放化疗+替莫唑胺续贯化疗等，或辅助贝伐单抗等靶向治疗，预后近十年也未见明显改善，其病因和进展转化的机制仍不十分清楚。揭示其发病机制，寻找有效的治疗策略是亟待解决的问题。此例人胶质母细胞瘤细胞系的建立，为了解胶质母细胞瘤的生物学特性、研究其癌变、分子遗传以及耐药复发演变机制等提供了丰富的实验材料，可以为胶质瘤发生发展方面的研究和化疗耐药机制相关研究等做出贡献。

由于胶质母细胞瘤的原代培养及体外稳定传代培养在技术上存在一定的难度，相对于胶质母细胞瘤表型的多样性和肿瘤的异质性，目前已建立的胶质母细胞瘤细胞系仍然十分有限。作为重要研究工具的细胞系非常少见，目前常用细胞系主要有U87，U251，U373，HS683，A172等，这些细胞系的建立时间均较早。此外，ATCC保藏的U87已被证实与最初在Uppsala实验室建立的U87不是同一来源细胞；U251和U373被证实为相同来源；HS683和A172因成瘤性不佳，在基础研究中使用很少。2016年WHO更新的第四版中枢神经系统肿瘤分类中明确推荐胶质瘤相关分子诊断，新的基因诊断标志物不断被大家认可并应用，如判断替莫唑胺化疗敏感性的MGMT启动子甲基化水平，判断预后的IDH突变、染色体1p/19q共缺失、TERT启动子区域突变情况等。在胶质瘤工具细胞中这些突变背景也越来越被科研工作者重视，有助于进行深入研究。因此建立新的胶质母细胞瘤细胞系，同时丰富呈现相应的突变背景，以丰富完备现有的胶质母细胞瘤细胞库和细胞相关背景信息，为研究胶质瘤提供合适的体外模型，促进胶质母细胞瘤的基础和临床研究是很有必要的。

发明内容

为实现上述技术目的，本发明公开了一种人胶质母细胞瘤细胞系GWH04及其培养方法与应用。本发明探究得到的新胶质母细胞瘤细胞系能够在体外稳定传代培养、裸鼠成瘤性好，可用于研究胶质瘤发生机理、耐药机理或筛选治疗药物等。

为更好的实现本发明技术目的，本发明公开了一种人胶质母细胞瘤细胞系GWH04，它是保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏号CCTCC NO.C202163的人胶质母细胞瘤细胞系GWH04。

进一步地，它为来源于一位右侧颞叶占位胶质母细胞瘤患者的肿瘤组织进行体外培养的细胞和/或子代细胞。

进一步地，所述子代细胞包括保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏号CCTCC NO.C202164的单克隆细胞珠GWH317。

其中，所述细胞系GWH04具备具有TERT基因启动子区C228T突变、TP53基因突变、PTEN基因突变、19q有缺失及IDH野生、MGMT启动子区域甲基化阴性的特征。

与此同时，本发明还公开了一种人胶质母细胞瘤细胞系GWH04的培养方法，它包括如下步骤：

1)取材：术中留取胶质母细胞瘤患者的肿瘤组织0.5cm³于含DMEM的无菌取样管中，置于4℃冰盒中并快速送到实验室；