[发明专利]伏马毒素B1的检测方法及生物传感器、试剂盒的制备方法及其应用

权利要求书

1.伏马毒素B1的检测方法，包括建立标准曲线；检测待测样品；根据标准曲线计算待测样品中FB1的浓度；还包括磁性微球上连接FB1适配体及其互补DNA（cDNA）、由cDNA引发的催化发夹自组装扩增、ssDNA-UCNPs连接扩增产物、氧化石墨烯淬灭UCNPs的荧光，所述检测方法步骤如下：

步骤（1）：将适配体和cDNA连接到磁性微球表面，然后适配体与目标物FB1进行特异性结合，通过磁分离富集得到cDNA， cDNA作为引发链与发夹H1、H2进行杂交，发生催化发夹自组装反应，得到H1-H2的dsDNA扩增产物；具体操作为：将链霉亲和素修饰的MMPs与生物素化的FB1适配体进行孵育，得到Apt-MMPs溶液；然后取Apt-MMPs溶液与过量cDNA进行杂交，磁分离后得到cDNA-Apt-MMPs，重悬于PBS缓冲液；然后，将不同浓度的FB1标准品分别与cDNA-Apt-MMPs溶液于37℃反应；随后进行磁分离得到上清液，得到富集的cDNA，与发夹H1、发夹H2混合进行杂交，得到dsDNA；

步骤（2）：氨基化的ssDNA偶联在UCNPs表面，得到ssDNA-UCNPs；

步骤（3）：ssDNA-UCNPs与步骤（1）中得到的H1-H2的dsDNA扩增产物进行结合；

步骤（4）：向体系中加入氧化石墨烯溶液，结合了扩增产物的UCNPs不会被氧化石墨烯淬灭荧光，通过荧光响应实现对目标物FB1的灵敏检测；具体操作为：立即加入GO，然后在980 nm激发光下测量体系的荧光强度值，选择546 nm处的发射峰作为定量标准。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）具体操作为：将PEI-UCNPs与戊二醛溶液于室温下震荡反应，离心，用PBS缓冲液洗涤两次后重悬于PBS缓冲液中；加入氨基化的ssDNA，缓慢震荡，离心，洗涤，重悬于PBS缓冲液中得到ssDNA-UCNPs；步骤（3）具体操作为：将ssDNA-UCNPs与dsDNA在37℃下杂交结合。

3. 用于检测伏马毒素B1的生物传感器，采用权利要求1所述的检测方法，由上转换纳米材料（UCNPs）和氧化石墨烯（GO）组成；所述上转换纳米材料选自纳米颗粒；所述上转换纳米材料粒径为25-30 nm。

4.根据权利要求3所述的生物传感器，其特征在于，所述生物传感器制成或包装成试剂盒。

5.用于检测伏马毒素B1的试剂盒，由权利要求3所述的生物传感器和FB1标准品组成。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品为一系列浓度梯度的标准品溶液；所述标准品浓度为0.032-500 ng/mL；所述标准品浓度为0.032、0.16、0.8、4、20、100、500 ng/mL。

7.权利要求3或4所述生物传感器或权利要求5或6所述的试剂盒的制备方法：

步骤一，合成磁性微球（MMPs）并对其进行表面修饰；

步骤二，合成上转换纳米材料并对其进行表面修饰；

步骤三，进行分装、包装和/或保存。

8.权利要求3或4所述的生物传感器或权利要求5或6所述的试剂盒在食品中FB1的检测的应用；所述食品包括玉米、燕麦及其制品。