[发明专利]一种两性霉素B的杂质A或杂质B的分离纯化方法

说明书

本发明提供了一种分离纯化两性霉素B的杂质A、杂质B的方法，该方法主要通过动态轴向压缩制备色谱，得到两性霉素B的杂质A和杂质B纯品。具体包括以下步骤：在不同条件下加速破坏得到两性霉素B的杂质A和B溶液，以0.02M柠檬酸水溶液/乙腈为流动相进行洗脱，收集目标杂质馏分，用分析型高效液相色谱测定其纯度，纯度可达90％以上。改变流动相以水/乙腈进行再洗脱除盐，收集目标馏分，减压浓缩后得到目标产物。两性霉素B的相关杂质存在样品不稳定，分离制备难度大等特点，本发明所述的两性霉素B的杂质A和杂质B的分离纯化方法，具有分离效率高、分离速度快、操作简便等优点。

技术领域

本发明属于药物分离纯化领域，具体地涉及两性霉素B的杂质A和杂质B分离制备方法。

背景技术

随着器官移植、免疫抑制药物、放疗和抗癌化疗等在先进的医学治疗中的应用以及人类免疫缺陷病毒(HIV)感染，使真菌病患者的人数有所增加。两性霉素B(AmphotericinB)为多烯类抗真菌药物，其主要作用机制为通过选择性与细胞膜的麦角固醇结合，增加膜的通透性，使重要物质外漏、有毒物质内渗，从而降低真菌生命力，达到抗真菌作用。两性霉素B因其抗菌谱广、抗真菌作用强而在临床治疗上发挥着重要的作用。

两性霉素B作为临床应用药物，其含量必须满足药品质量控制标准。因此，对其杂质控制即杂质谱的研究，即掌握两性霉素B杂质种类、含量、来源及结构信息是非常必要的。截至目前，国内外相关期刊文献和专利著作等对两性霉素B的研究主要集中在临床应用及其毒副作用和含量测定这几个方面，对两性霉素B杂质分离纯化相关研究少有报道，尤其是两性霉素B杂质A和杂质B的分离纯化方法。

如有学者对两性霉素B杂质进行了系统的研究，包括两性霉素B的碱性条件降解产物的考察研究、两性霉素B的酸性条件降解产物的考察研究以及两性霉素B的DMF溶液条件下水浴加热降解产物的研究。

CN102115484A发明了一种两性霉素B降解产物、其制备方法及其应用，该发明通过制备液相色谱仪分离纯化降解产物，再经凝胶过滤纯化，冷冻干燥后得两性霉素B降解产物(AmB(H))，产率仅9％。

目前对两性霉素B杂质的考察研究资料较少，两性霉素B杂质稳定性较差，分离具有一定难度，如果能开发通用的适用于两性霉素B杂质的分离制备方法，得到两性霉素B杂质纯品，即能完善两性霉素B的杂质谱，对于两性霉素B杂质的研究具有重大意义。

发明内容

本发明的目的在于提供两性霉素B杂质的分离制备方法，该方法操作简单，分离效率高，能够得到纯度较高的杂质A和杂质B。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

本发明所述两性霉素B杂质A、杂质B的结构式如下所示：

本发明具体地涉及两性霉素B杂质A或杂质B分离制备方法，包括如下操作步骤：

(1)对两性霉素B进行预处理，得到两性霉素B的杂质溶液；

(2)在动态轴向压缩制备色谱中，以柠檬酸水溶液/乙腈为流动相进行洗脱，收集目标杂质馏分，然后经过减压浓缩，得到两性霉素B杂质浓缩液；

(3)以水/乙腈为流动相平衡色谱柱，改变流动相比例，将步骤(2)中得到的两性霉素B杂质浓缩液进行再洗脱除盐，收集目标馏分；

(4)将步骤(3)收集的馏分进行减压蒸馏，除去大部分溶剂后，然后进行冷冻干燥，得到两性霉素B的杂质A或杂质B。

当两性霉素B的杂质为杂质A时，优选的，步骤(1)中，前处理方式为：50mg两性霉素B，加入5mL的NMP、35mL乙腈以及0.1mL浓盐酸。超声搅拌至完全溶解，再加入5mL的10g/L的乙酸铵溶液。