[发明专利]蛋白去乙酰化酶SIRT1在调节小鼠前列腺癌RM-1细胞放射敏感性中的应用

说明书

本发明公开蛋白去乙酰化酶SIRT1在调节小鼠前列腺癌RM‑1细胞放射敏感性中的应用，具体指过表达或敲减蛋白去乙酰化酶SIRT1在调节小鼠前列腺癌RM‑1细胞放射敏感性中的应用。增加SIRT1表达可减弱RM‑1细胞的放射敏感性，降低SIRT1表达可增强RM‑1细胞的放射敏感性；具体为：RM‑1细胞过表达或敲减SIRT1并接受16Gy X线照射后，western blot验证凋亡相关蛋白cleaved‑caspase3表达，结果显示：照射引起cleaved‑caspase3蛋白表达增加，过表达SIRT1减少cleaved‑caspase3蛋白表达，敲减SIRT1增加cleaved‑caspase3蛋白表达；RM‑1细胞过表达或敲减SIRT1并接受16Gy X线照射后，流式细胞术检测凋亡细胞，结果显示：照射引起凋亡细胞增多，过表达SIRT1减少凋亡细胞，敲减SIRT1增加凋亡细胞。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及蛋白去乙酰化酶SIRT1在调节小鼠前列腺癌RM-1细胞放射敏感性中的应用。

背景技术

蛋白去乙酰化酶SIRT1是Sirtuin蛋白家族的一员，是一种高度保守的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)依赖性去乙酰化酶。SIRT1在酶促反应中可通过消耗NAD⁺并生成NAM，从很多蛋白底物中去除乙酰基，从而改变转录活性。SIRT1可参与调节多种生理进程，如代谢、老化、凋亡、自噬、炎症、DNA修复；SIRT1也参与心脏病、糖尿病、癌症等病理进程。

SIRT1在不同肿瘤类型中的表达不同，其表达失调对于肿瘤的发生发展产生一定影响。不同研究表明，SIRT1既可抑制肿瘤的增殖和转移；也可以增强癌干性和上皮间质转化，促进肿瘤发展。

SIRT1在前列腺癌中表达增高，但其对于前列腺癌的发生发展以及放射敏感性调节尚有争论。

发明内容

针对现有技术中的不足之处，本发明提供蛋白去乙酰化酶SIRT1在调节小鼠前列腺癌RM-1细胞放射敏感性中的应用。

为了达到上述目的，本发明提供蛋白去乙酰化酶SIRT1在调节小鼠前列腺癌RM-1细胞放射敏感性中的应用。

优选地，过表达蛋白去乙酰化酶SIRT1在调节小鼠前列腺癌RM-1细胞放射敏感性中的应用。

具体的，所述过表达蛋白去乙酰化酶SIRT1包括以下步骤：

S1、将小鼠前列腺癌RM-1细胞接种于六孔板，密度为1.5×10⁵/孔，置于37℃、5％CO₂培养箱生长24小时，所用培养基为补充了10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素的RPMI-1640完全培养基；

S2、将2.5μg SIRT1质粒和阴性对照分别与脂质体转染试剂混匀，静置10分钟；

S3、将培养基更换为opti-MEM培养基，把质粒溶液逐滴加入培养皿，孵育6小时；

S4、更换为不含抗生素的RPMI-1640完全培养基，用X-RAD 225辐照仪以16Gy剂量、2Gy/分钟的剂量率照射细胞，照射结束后，细胞继续生长24小时。

优选地，敲减蛋白去乙酰化酶SIRT1在调节小鼠前列腺癌RM-1细胞放射敏感性中的应用。

具体的，所述敲减蛋白去乙酰化酶SIRT1包括以下步骤：

S1、将小鼠前列腺癌RM-1细胞铺于六孔板，铺板密度为1.5×10⁵/孔，置于37℃、5％CO₂培养箱生长24小时，所用培养基为补充了10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素的RPMI-1640完全培养基；

S2、将100nM SIRT1小干扰RNA和阴性对照分别与脂质体转染试剂混匀，静置10分钟；