[发明专利]肝癌药物仑伐替尼耐药机制的研究方法

说明书

本发明公开了一种肝癌药物仑伐替尼耐药机制的研究方法，包括以下步骤，S1：分别构建仑伐替尼耐药和仑伐替尼敏感的肝癌细胞；S2：利用高通量转录组测序技术分析仑伐替尼耐药引起的基因差异，分析仑伐替尼耐药和仑伐替尼敏感两组肝癌细胞差异的LncRNAs，筛选分析仑伐替尼耐药和仑伐替尼敏感肝癌细胞中显著高表达的LncRNAs；S3：使用体外和体内的方法检测步骤S2中筛选出来的新分子NRAV在仑伐替尼耐药和仑伐替尼敏感肝癌细胞中的水平；S4：分析NRAV与仑伐替尼耐药性的关系。本发明通过筛选肝癌细胞中与仑伐替尼耐药相关的新分子，探索NRAV与仑伐替尼治疗效果的关系，为进一步探索NRAV与肝癌药物仑伐替尼耐药机制及其在肝癌临床诊断及治疗中的应用提供基础。

技术领域

本发明涉及肝癌药物仑伐替尼技术领域，尤其涉及肝癌药物仑伐替尼耐药 机制的研究方法。

背景技术

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC，简称肝癌)是肝脏最常见的恶性 肿瘤，具有隐匿性、进展迅速、恶性程度高、治疗效果差、化疗耐药率高等特 点。近70％的HCC患者诊断时已处于疾病中晚期，不再适合根治性治疗方案。 基于仑伐替尼的靶向治疗是中晚期HCC患者的首选药物之一，它属于喹啉羧酰 胺类，是一种新型口服多激酶抑制剂，较索拉非尼抑制血管内皮生长因子发挥 抗肿瘤效果具有明显优势。目前TKI的临床应用使得部分不可切除的肝癌患者 出现降期，甚至部分患者达到临床手术指征而获得更多治愈机会，因此被认为 是目前中晚期肝癌的重要治疗手段。然而仑伐替尼化疗耐药是其一大挑战。因此，探索预警仑伐替尼耐药的新分子，可最大程度优化治疗方案，提高治疗效 果。

长链非编码RNA(lncRNAs)是近年来发现的一类主要的非编码RNA， 其长度超过200个碱基，不仅调节人体基本生物学过程，而且在人类疾病特别 是肿瘤性疾病中发挥重要作用。肝癌中lncRNAs可作为促癌或抑癌分子，是判 断肝癌诊断、治疗、预后的潜在标记物。研究发现，体液中可检测到 lncRNAs存在，不同的lncRNA代表癌组织的起源，且在细胞外环境中具有动 态调节性、组织特异性和丰富性，对HCC诊断、治疗及监测预后具有重要价值。 据报道，长链非编码RNA中的NR2F1-AS1及UCA1可促进HCC进展，调节 耐药相关蛋白ABCC1和经典的AKT/mTOR癌症通路介导仑伐替尼化疗耐药的 发生。关于lncRNA介导仑伐替尼耐药的报道较少，并且缺乏探索仑伐替尼耐 药标记物的相关研究。因此，筛选仑伐替尼耐药相关lncRNA，评估lncRNA用 于仑伐替尼化疗耐药的诊断标记物的价值，可推进lncRNA的临床应用。

发明内容

针对上述存在的问题，本发明旨在提供一种肝癌药物仑伐替尼耐药机制的 研究方法，通过筛选肝癌细胞中与仑伐替尼耐药相关的新分子，探索NRAV与 仑伐替尼治疗效果的关系，得到NRAV与肝癌药物仑伐替尼耐药机制的关系。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

肝癌药物仑伐替尼耐药机制的研究方法，其特征在于，包括以下步骤，

S1：分别构建仑伐替尼耐药和仑伐替尼敏感的肝癌细胞；

S2：高通量筛选肝癌细胞中与仑伐替尼耐药相关的新分子；

S3：分析步骤S2中筛选出来的新分子NRAV基因在仑伐替尼耐药和仑伐替 尼敏感肝癌细胞及组织中的表达水平；

S4：分析NRAV调控肝癌仑伐替尼耐药可能机制。

进一步的，步骤S2的具体操作包括以下步骤，

S201：利用高通量转录组测序技术分析仑伐替尼耐药引起的基因差异，分析 仑伐替尼耐药和仑伐替尼敏感两组肝癌细胞差异的lncRNAs；

S202：筛选仑伐替尼耐药和仑伐替尼敏感肝癌细胞中显著高表达的 lncRNAs。

进一步的，步骤S3的具体操作包括以下步骤，