[发明专利]博落回提取物作为ERK1/2-MAPK信号通路抑制剂及其应用

说明书

本发明涉及博落回提取物作为ERK1/2‑MAPK信号通路抑制剂及其应用，博落回提取物具有ERK1/2抑制作用，可通过抑制ERK1/2‑MAPK信号通路而下调促炎因子TNF‑α、IFN‑γ的mRNA和蛋白的表达，缓解炎症反应，减少炎症造成的损伤。博落回提取物可应用于制备防治仔猪肠炎相关药物。本发明的有益效果为，1)本发明首次证实了博落回提取物抑制了IPEC‑J2细胞ERK1/2‑MAPK信号通路。2)本发明包括利用抑制ERK1/2‑MAPK信号通路降低促炎介质表达的原理方法生产制造相关抗炎药品。3)本发明为后期开展与ERK1/2‑MAPK信号通路相关的抗炎因子、抗炎对象进行更深层次的研究奠定了坚实的理论基础。

技术领域

本发明属于生物、医药技术领域，尤其是涉及一种基于博落回提取物作为ERK1/2-MAPK信号通路抑制剂、应用技术领域。

背景技术

组织损伤和微生物入侵等可引起机体炎症，炎症反应是机体免疫系统对外界刺激的防御性反应，是许多病理生理过程的重要组成部分。炎症反应通常是自限性的，并在促炎信号和抗炎信号之间保持平衡。充分的炎症反应可以让机体远离严重的组织损伤，但长期升高的炎症介质水平可导致机体信号通路受损，促进病原体入侵和疾病的发生，过度的炎症对宿主有潜在的危险。为了维持免疫稳态，控制炎症反应对宿主避免组织损伤至关重要。

肠道上皮细胞可以吸收水分和营养物质，并作为抵抗微生物的第一道屏障，还可以诱导和调节免疫反应。来源于空肠的非瘤猪肠上皮细胞系(Porcine intestinalepithelial cell line J2，IPEC-J2)与原始组织有很强的相似性，适用于初步研究，是一种被广泛接受的肠道体外模型。脂多糖(LPS)是一种内毒素，由革兰氏阴性菌产生，能够通过激活多种信号通路来诱导免疫紊乱，研究人员经常使用它来诱导炎症反应。

丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinase，MAPK)是一组能被不同的细胞外刺激，如细胞因子、神经递质、激素、细胞应激及细胞黏附等激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。MAPK信号通路被认为是与调节炎症介质相关的真核细胞信号传输网络的一部分，是调节炎症反应的经典信号通路。MAPKs蛋白(包括ERK、JNK和p38蛋白激酶)被激活后作用于各自的底物，产生炎症因子，调节炎症反应。细胞因子在调节炎症反应中起着至关重要的作用。促炎细胞因子如TNF-α、IFN-γ是重要的炎症反应介质，可提高内皮细胞通透性，加速细胞凋亡，引发炎症级联反应，导致器官功能障碍，直接或间接地参与一系列病理过程，在先天性免疫反应中发挥重要作用。

博落回(Macleaya cordata)是一种世界范围内广泛使用的药用植物，其药用历史有1000多年。博落回的主要活性成分为生物碱。目前，已从博落回中鉴定或分离出超过147种生物碱，包括血根碱(Sanguinarine，SA)、白屈菜红碱(Chelerythrine，CHE)、原阿片碱(Protopine，PRO)、别隐品碱(Allocryptopine，ALL)、小檗碱(Berberine，BER)等，根据化学结构，它们大多属于异喹啉类生物碱。长久以来大量的研究发现博落回提取物(Macleayacordata extract，MCE)及其有效成分具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗癌、杀虫、保护肝脏、提高免疫力等多种作用功效。虽然MCE已被证实具有抗炎活性，但MCE抗炎活性的作用机制尚不完全清楚。目前对MCE或其活性成分抗炎机制的研究报道较少，并且研究的内容多数集中在NF-κB信号通路，对MAPK信号通路的研究报告相对更少，对博落回提取物通过抑制ERK1/2-MAPK信号通路进行仔猪肠炎防治方面的研究尚未见报道。

发明内容

为了研究MCE作为ERK1/2-MAPK信号通路抑制剂在制备防治仔猪肠炎药物方面的应用，本研究利用LPS诱导的IPEC-J2细胞作为炎症模型，研究MCE的抗炎活性及其对ERK1/2-MAPK信号通路的抑制作用。本发明提供一种博落回提取物作为ERK1/2-MAPK信号通路抑制剂及其应用。此外，本发明还提供一种具有抗炎活性的ERK1/2-MAPK通路抑制剂潜在物质的体外筛选方法。