[发明专利]冻存液及其制备方法与在人肾上皮细胞的应用

权利要求书

1.一种冻存液，其特征在于，其包括以下质量百分含量的组份：玉米糊精0.001％～0.01％、聚甘油1％～20％、三羟甲基氨基甲烷0.01％～0.05％、L-天门冬氨酸0.001％～0.005％、磷酸二氢钠0.1％～0.4％、磷酸氢二钠0.2％～0.8％、PBS缓冲液10％～25％，余量为水。

2.根据权利要求1所述的冻存液，其特征在于，所述的水为注射用水。

3.一种冻存液的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：

(1)预备以下质量百分含量的组份：玉米糊精0.001％～0.01％、聚甘油1％～20％、三羟甲基氨基甲烷0.01％～0.05％、L-天门冬氨酸0.001％～0.005％、磷酸二氢钠0.1％～0.4％、磷酸氢二钠0.2％～0.8％、PBS缓冲液10％～25％，余量为水；

(2)往所述水中先加入玉米糊精、聚甘油、三羟甲基氨基甲烷，再加入L-天门冬氨酸搅拌混合均匀，获得混合溶液；

(3)在混合溶液冷却至室温后，用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节pH至6.2～8.2，并加入PBS缓冲液定容至预定体积，制得冻存液。

4.一种权利要求1-2任意一项中所述的冻存液或采用权利要求3所述冻存液的制备方法制得的冻存液在人肾上皮细胞冷冻保存中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，应用步骤如下：

(S1)将人肾上皮细胞加入所述的冻存液中，在混合均匀后获得含人肾上皮细胞的冷冻保存液；

(S2)将含人肾上皮细胞的冷冻保存液装入冻存管，然后放入程序降温盒，在室温平衡3～10min；

(S3)将程序降温盒放入-70～-90℃的环境中进行梯度降温，超过6～8小时后转入液氮长期保存。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤(S1)采用移液器吹打混合均匀。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤(S3)中的降温速率为1℃/min。