[发明专利]一种检测microRNA的方法和试剂在审
| 申请号： | 202111644739.2 | 申请日： | 2021-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN114196738A | 公开（公告）日： | 2022-03-18 |
| 发明（设计）人： | 丁佳女;郑宜文;沈青青 | 申请（专利权）人： | 杭州百迈生物股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6848 | 分类号： | C12Q1/6848;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 311228 浙江省杭州市杭州大江东*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 microrna 方法 试剂 | ||
1.检测microRNA的试剂，包括用于连接反应的连接引物和用于扩增反应的扩增引物，其特征在于，所述连接引物包括一条线性引物和一条茎环引物，所述扩增引物是microRNA经连接反应后生产的cDNA设计。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述线性引物包括一段Poly(A)尾结构序列以及一段与所述靶标microRNA的3’端杂交的序列组成。
3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述茎环引物包括一段与靶标microRNA的5’端杂交的序列及茎环结构序列组成，茎环引物的5’端进行磷酸化修饰；靠近5’端的碱基点为连接点。
4.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，其中一条扩增引物是在线性引物的基础上去掉Poly(A)结构，并随机增加五个碱基。
5.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，还包括探针。
6.一种检测microRNA的方法，包括以下步骤：
(1)样本处理，捕获作为反应模板的靶RNA；
(2)将反应试剂加入至PCR反应管中，所述反应试剂包括连接引物和扩增引物；
(3)向PCR反应管中加入步骤1中处理好的模板；
(4)启动连接扩增一步法反应程序；
(5)反应结束，进行结果分析；
其中所述的连接引物和扩增引物选自权利要求1至5之一所述的试剂。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤1包括向样本内加入磁珠，混匀，弃上清，得到模板。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR反应为实时荧光PCR。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述反应试剂还包括探针。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述一步法反应程序包括37℃，15min，循环1次；95℃，5min，循环1次；95℃，15s，60℃，35s，循环40次。
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