[发明专利]一种小口径心血管植入物及其制备方法

权利要求书

1.一种小口径心血管植入物，其特征是：包括心血管植入物本体和孵育在心血管植入物本体外表面的双层响应性凝胶；所述双层响应性凝胶的内层为ATP响应水凝胶，所述ATP响应水凝胶包含有DENND1A蛋白；所述双层响应性凝胶的外层为ROS响应性水凝胶，所述ROS响应性水凝胶包含有神经轴突导向分子-1。

2.根据权利要求1所述的一种小口径心血管植入物，其特征是，所述ATP响应水凝胶的制备方法为：将八臂PEG叠氮化物和ATP响应分子按照摩尔质量比1:3～1:5混合,再混入1％～10％DENND1A蛋白，在室温下反应5～20min即可成胶；

所述ROS响应水凝胶的制备方法为：将八臂PEG叠氮化物和ROS响应分子按照摩尔质量比1:3～1:5混合，再混入1％～10％神经轴突导向分子-1，在室温下反应5～20min即可成胶。

3.根据权利要求1所述的一种小口径心血管植入物，其特征是：所述小口径心血管植入物为管状，口径为0.5～4mm，长度为0.5～20cm。

4.一种小口径心血管植入物的制备方法，其特征是，步骤如下：

(1)构建小口径心血管植入物本体；

(2)制备ATP响应分子和ROS响应分子；

(3)使用八臂PEG叠氮化物、ATP响应分子和DENND1A蛋白制备ATP响应水凝胶混合液；使用八臂PEG叠氮化物、ROS响应分子和神经轴突导向分子-1制备ROS响应性水凝胶混合液；

(4)使所述ATP响应水凝胶混合液和ROS响应性水凝胶混合液依次在所述心血管植入物本体表面成胶，获得小口径心血管植入物。

5.根据权利要求4所述的一种小口径心血管植入物的制备方法，其特征是，步骤(1)所述的心血管植入物本体的制备方法如下：

先使用脱细胞液脱去离体血管中的细胞；然后使用核酸酶脱去所述离体血管中的核酸，获得血管基质材料；再在所述血管基质材料表面孵育胶原和血管内皮生长因子(VEGF)，获得心血管植入物本体。

6.根据权利要求5所述的一种小口径心血管植入物的制备方法，其特征是，所述心血管植入物本体的具体制备步骤为：

A.所述脱细胞液为0.025％～0.25％的胰蛋白酶，所述脱细胞液与离体血管在0℃～37℃下振荡反应30min～90min完成脱细胞；所述核酸酶为DNA酶和RNA酶，所述核酸酶与离体血管在0℃～37℃下振荡反应10min～45min，完成脱核酸，获得血管基质材料；

B.用PBS溶液洗涤所述血管基质材料后，再所述血管基质材料的表面孵育10％-50％胶原；然后在0℃～37℃下与100～500ng/ml血管内皮生长因子((VEGF))交联12～36h，获得心血管植入物本体。

7.根据权利要求4所述的一种小口径心血管植入物的制备方法，其特征是：步骤(2)所述的ATP响应分子由ATP核酸适配体、ssDNA1和ssDNA2按照1:1:1～1:2:2的比例，在0℃～50℃下反应6h～24h而成。

8.根据权利要求7所述的一种小口径心血管植入物的制备方法，其特征是：所述ATP核酸适配体的序列为CACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGTT；所述ssDNA1的序列为5’-ACTCCCCCAGGTGTTTTTT-NH₂-DBCO-3’；所述ssDNA2的序列为5’-DBCO-NH₂-TTTTTTAACCTTCCTCCGC-3’。

9.根据权利要求4所述的一种小口径心血管植入物的制备方法，其特征是：步骤(3)述的ROS响应分子为氨基硫代缩酮和二苯并环辛炔(DBCO)按照摩尔质量比1:1～1:3，在0℃～75℃，搅拌反应30min～2h而成。

10.根据权利要求4所述的一种小口径心血管植入物的制备方法，其特征是：步骤(4)所述的ATP响应水凝胶混合液和ROS响应性水凝胶混合液依次在所述心血管植入物本体表面成胶的具体步骤如下：

a.先将心血管植入物本体的两端用1-0手术线扎住后，浸入所述ATP响应水凝胶混合液中，然后取出，使所述心血管植入物本体的表面覆盖一薄层混合液Ⅰ，等待所述薄层混合液Ⅰ反应成胶；

b.然后再将所述心血管植入物本体浸入所述ROS响应性水凝胶混合液中，再取出，使所述心血管植入物本体表面覆盖一薄层混合液Ⅱ，等待所述薄层混合液Ⅱ反应成胶后，将血管植入物两端手术线解开。