[发明专利]一种超甜玉米的转化方法

权利要求书

1.休息培养基，其特征在于，配方如下：

2×MS+蔗糖30g/L+脯氨酸1.38g/L+盐酸硫胺素0.5mg/L+AgNO3 20mM+水解酪蛋白0.5g/L+2,4-D 0.5mg/L+毒莠定2.2mg/L+特美汀200mg/L。

2.权利要求1所述的休息培养基在玉米遗传转化中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的玉米为自交系Qun01X01。

4.一种超甜玉米的遗传转化方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将含有草丁膦抗性基因的EHA105农杆菌菌株在活化培养基上划线，28℃黑暗培养24h；

2)将玉米自交系授粉后6-15天，玉米幼胚长至0.5-2.0mm时从玉米穗上剥取获得的幼胚浸入悬浮培养基，悬浮浸泡10-30min，完成幼胚收集后移走液体，热激3min，再加入携带含有草丁膦抗性基因的EHA105农杆菌的侵染培养基中侵染5min，期间向农杆菌侵染液中吹打空气；

3)将幼胚移至共培养基上，23℃黑暗培养24-96h；

4)将幼胚移至休息培养基上，26-34℃黑暗培养1-2周；

5)将幼胚移至选择培养基上培养，选择培养基中含草丁膦诱导抗性愈伤组织；将抗性愈伤组织转移至分化培养基中，25℃，5000lx，光照培养3周，分化形成再生小苗；

6)再生小苗在生根培养基上生根后炼苗、移栽，得到转基因玉米；

其中，所用到的培养基配方如下：

农杆菌活化培养基：D-葡萄糖20g/L+MES 19.5g/L+NaH₂PO₄ 0.06g/L+NH₄Cl 1g/L+MgSO4·7H₂O 0.3g/L+KCl 0.15g/L+CaCl₂·2H₂O 0.0132g/L+FeSO₄·7H₂O 0.0025g/L+琼脂15g/L；和

悬浮培养基：1/2MS+蔗糖68.5g/L+葡萄糖36g/L+L-脯氨酸0.115g/L；和

侵染培养基：1/2MS+蔗糖68.5g/L+葡萄糖36g/L+L-脯氨酸0.115g/L+乙酰丁香酮200mM+半胱氨酸200mg/L；和

共培养基：1/2MS+蔗糖20g/L+葡萄糖10g/L+脯氨酸0.115g/L+盐酸硫胺素0.5mg/L+AgNO3 20mM+L-半胱氨酸200mg/L+2,4-D 0.5mg/L+毒莠定2.2mg/L+乙酰丁香酮200mM；和

休息培养基，配方如权利要求1所述；和

选择培养基：MS+蔗糖30g/L+脯氨酸1.38g/L+盐酸硫胺素0.5mg/L+AgNO3 20mM+水解酪蛋白0.5g/L+2,4-D 0.5mg/L+毒莠定2.2mg/L+特美汀200mg/L+草丁膦40mg/L；和

分化培养基：MS+蔗糖20g/L+6-BA 0.1mg/L+KT 1mg/L+特美汀200mg/L；和

生根培养基：MS+蔗糖20g/L+MES 0.5g/L+IBA 0.2mg/L。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述的玉米自交系为Qun01X01。