[发明专利]一种超甜玉米的转化方法

说明书

本发明属于基因工程和转基因技术领域，具体涉及一种超甜玉米的转化方法。本发明通过对热激幼胚、侵染培养基和休息培养基配方等参数优化，使超甜玉米自交系Qun01X01从无法转化提升到转化效率达到10.77％。利用本发明提供的方法，可以实现以超甜玉米自交系为受体的高效遗传转化，从而直接培育具有特定性状的转基因超甜玉米材料和品种。

技术领域

本发明属于基因工程和转基因技术领域，具体涉及一种超甜玉米的转化方法。

背景技术

超甜玉米属甜质玉米(Zea mays L.Sacchara sturt)，除了具有玉米的粮食属性外，还享有蔬菜、水果玉米之称，已经成为当今世界重要的栽培作物，鲜苞及其制品是美、日、西欧以及东南亚一些国家和地区的重要消费食品之一。我国的超甜玉米种植面积和产量均具世界首位，华南地区是我国超甜玉米主产区，是广东省的特色和优势作物。

遗传转化是培育转基因玉米品种的基本技术体系。尽管超甜玉米已经公开了相关的遗传转化方法(CN 1763207 B)，然而很多是通过基因枪方式实现的。农杆菌介导的转化方法在整合、拷贝数、遗传稳定性等方面还是具有优势。然而基因型是限制农杆菌介导法玉米转化效率的重要因素。同样的转化方法在不同基因型玉米(即不同的受体玉米品种)上表现出的转化效率有着天壤之别。超甜玉米作为一种特殊的玉米种质，需要根据具体的受体材料开发对应的转化方法。

超甜玉米自交系Qun01X01是广东省农业科学院作物研究所利用甜玉米杂交种群体混合授粉，再通过低温筛选、一环系选育、连续自交、穗行选育等一系列过程选育而成(品种权号CNA20160271.0)，植株表现持绿性高、籽粒黄色、籽粒较大、色泽光亮，甜度高、果皮薄、配合力较高。以该自交系为父本培育的粤甜28号为广东省主导品种，是目前应用最广泛的超甜玉米品种。然而该自交系品种还没有成熟高效的农杆菌介导的转化方法，这为以该自交系品种为受体，通过转基因技术进一步改良超甜玉米的特定性状带来了障碍。

为解决上述问题，本发明对热激幼胚、侵染培养基和休息培养基配方等参数进行优化，将Qun01X01受体从无法转化提升到转化效率达到10.77％。利用本发明提供的方法，可以实现以玉米自交系Qun01X01为受体的高效遗传转化，从而直接培育具有特定性状的转基因Qun01X01超甜玉米材料和品种。

发明内容

本发明的目的是提供一种超甜玉米自交系Qun01X01的转化方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了一种休息培养基，其特征在于，配方如下：

2×MS+蔗糖30g/L+脯氨酸1.38g/L+盐酸硫胺素0.5mg/L+AgNO3 20mM+水解酪蛋白0.5g/L+2,4-D 0.5mg/L+毒莠定2.2mg/L+特美汀200mg/L。

本发明还提供了上述休息培养基在玉米遗传转化中的应用。

在一些实施方案中，上述的玉米为自交系Qun01X01。

本发明还提供了一种超甜玉米的遗传转化方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将含有草丁膦抗性基因的EHA105农杆菌菌株在活化培养基上划线，28℃黑暗培养24h；

2)将玉米自交系授粉后6-15天，玉米幼胚长至0.5-2.0mm时从玉米穗上剥取获得的幼胚浸入悬浮培养基，悬浮浸泡10-30min，完成幼胚收集后移走液体，热激5min，再加入携带含有草丁膦抗性基因的EHA105农杆菌的侵染培养基中侵染5min；

3)将幼胚移至共培养基上，23℃黑暗培养24-96h；

4)将幼胚移至休息培养基上，28℃黑暗培养1-2周；