[发明专利]一种腈水解酶突变体、工程菌及其应用

权利要求书

1.一种腈水解酶突变体，其特征在于所述突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.一种权利要求1所述腈水解酶突变体的编码基因。

3.一种由权利要求2所述编码基因构建的重组基因工程菌。

4.一种权利要求1所述腈水解酶突变体在催化苯乙腈合成苯乙酸中的应用，其特征在于所述的应用为：以含腈水解酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养后获得的湿菌体或湿菌体破碎后提取的酶作为生物催化剂，以苯乙腈为底物，以甲醇为助剂，以pH为7.5～8.5的缓冲液为反应介质构成转化体系，在30～60℃、150～500rpm/min条件下进行转化反应，反应结束后取反应液分离纯化，获得苯乙酸；转化体系中底物的加入终浓度以缓冲液体积计为20-100mM，催化剂的用量以湿菌体重量计，所述湿菌体加入量以缓冲液体积计为5-20g/L；所述甲醇加入体积浓度为2-8％。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于缓冲液为pH 8.0的Tris-HCl缓冲溶液。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述湿菌体的制备方法为：含腈水解酶突变体编码基因的工程菌接种至含终浓度50mg/L卡那霉素的LB液体培养基中，37℃、200rpm条件下振荡培养8-10h，获得种子液；将种子液以体积浓度2％的接种量接种至新鲜的含有终浓度50mg/L卡那霉素的LB液体培养基中，37℃、180rpm条件下振荡培养至菌体OD₆₀₀为0.6-0.8，加入终浓度0.1mM的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，28℃、180rpm条件下诱导培养10-12h，于4℃、8000rpm离心10min，收集菌体细胞，即为湿菌体。