[发明专利]重组菌和表达酮还原酶的方法在审
| 申请号： | 202111649747.6 | 申请日： | 2021-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN114395519A | 公开（公告）日： | 2022-04-26 |
| 发明（设计）人： | 倪晶霞;尚永崇;崔俊杰;孙丰来;徐幸福;朱景仰 | 申请（专利权）人： | 上海合全药物研发有限公司;上海合全药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/53;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈扬扬 |
| 地址： | 200120 上海市浦东新区*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 表达 还原酶 方法 | ||
1.一种重组菌，其包含分子伴侣载体并表达酮还原酶，所述分子伴侣载体包括pGro7载体。
2.如权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述酮还原酶来自赤红球菌(Rhodococcusruber)株SD3。
3.如权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述酮还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
4.如权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌包括大肠杆菌，优选地，所述大肠杆菌包括大肠杆菌BL21(DE)3。
5.一种表达酮还原酶的方法，所述方法包括：
a.提供如权利要求1-4中任一项所述的重组菌；
b.培养所述重组菌；和
c.在较低温度下诱导所述重组菌以表达所述酮还原酶。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述较低温度为10-35℃，优选15-30℃，更优选20-25℃。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导持续5-50小时，优选10-20小时，更优选12-16小时。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导包括使用诱导剂，优选地，所述诱导剂包括以下的一种或多种：阿拉伯糖和IPTG。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述诱导包括：
(1)培养OD达到0.2-0.4，优选0.25-0.35，更优选0.3时，添加阿拉伯糖；和
(2)培养OD达到0.5-0.7，优选0.55-0.65，更优选0.6时，添加IPTG。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，(1)包括添加0.1-0.5mg/mL，0.15-0.3mg/mL，更优选0.2mg/mL的阿拉伯糖，并且(2)包括添加0.05-0.3mmol/L，优选0.08-0.15mmol/L，更优选0.1mmol/L的IPTG。
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