[发明专利]重组菌和表达酮还原酶的方法

说明书

本申请公开了一种重组菌和表达酮还原酶的方法。该重组菌包含分子伴侣载体并表达酮还原酶，所述分子伴侣载体包括pGro7载体。

技术领域

本申请涉及酶技术领域，具体涉及重组菌和表达酮还原酶的方法。

背景技术

大肠杆菌作为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统，具有结构简单、生长速度快且易于培养、遗传背景明确、便于基因操作等优点。虽然大肠杆菌有众多的优点，但并非每一种基因都能在其中有效表达。

这归因于每种基因都具有独特的结构、mRNA的稳定性和翻译速度、蛋白质折叠的难易程度、宿主细胞蛋白酶对蛋白质的降解、外源基因和大肠杆菌的密码子偏好性的差别以及蛋白质对宿主的潜在毒性等。

因此应用大肠杆菌表达系统表达异源蛋白在实际应用中就或多或少地面临着上述的一些困难，其中最常见的是目的蛋白形成不溶性的包涵体，这为后续的研究工作带来了许多不便。包涵体的形成可能是由于新生肽链不能在正确位置形成二硫键，从而导致二硫键错配进而错误折叠的结果[ANNA MITRAKI，BENTLEY FANE，*CAMERON HAASE-PETJINGELL et al.Global suppression of protein folding defects and inclusionbody formation[J].Science.1991：253(5015)：54-58.]。而分子伴侣能够帮助蛋白正确折叠，提高蛋白的可溶性表达，减少包涵体的形成。Pfeffer等[Jan Pfeffer，Monika Rusnak，Carl-Erik Hansen，et al.Functional expression of lipase A from Candidaantarctica in Escherichia coli-A prerequisite for high-throughput screeningand directed evolution[J].Journal of Molecular Catalysis B：Enzymatic 45(2007)：62-67.]在大肠杆菌表达目的蛋白的同时表达分子伴侣蛋白提高了目的蛋白的可溶性表达比例。这种与分子伴侣共表达以提高可溶性目的蛋白的方法，越来越成为研究者们的关注重点。

中国专利申请CN110499312A公开了一种提高酶的可溶性表达的标签及方法，并且中国专利申请CN112812191A公开了一种提高酶可溶性表达的融合标签及其应用。然而，这些通用策略并非针对所有酶都有效。针对酮还原酶，本领域还没有公开一种已证明可行的提高其可溶性表达的方法。

本领域仍然需要寻找一种能提高酮还原酶的可溶性表达的方法。

发明内容

为解决上述技术问题，本申请的一个方面提供一种重组菌，其包含分子伴侣载体并表达酮还原酶，所述分子伴侣载体包括pGro7载体。

本发明的另一个方面提供了一种表达酮还原酶的方法，所述方法包括：

a.提供一种重组菌，其包含分子伴侣载体并表达酮还原酶，所述分子伴侣载体包括pGro7载体；

b.培养所述重组菌；和

c.在较低温度下诱导所述重组菌以表达所述酮还原酶。

附图说明

下面结合附图更详细地说明本申请，附图中：

图1是显示本申请的一个实施方式的酮还原酶---pGro7重组菌在37℃培养至OD达到0.6时添加0.1mM的IPTG，20℃发酵16h的过程中蛋白质表达概况的凝胶电泳图，其中：M是蛋白质分子量标准Marker，1是诱导0h后的全细胞，2是诱导16h后的全细胞，3是诱导16h后的上清，4是诱导16h后的沉淀。