[发明专利]重组吡喃糖氧化酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种编码吡喃糖氧化酶的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：

(i)具有如SEQ ID NO.1所示序列的多核苷酸；

(ii)具有与如SEQ ID NO.1所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和

(iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。

2.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求1所述的多核苷酸。

3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括表达His×6标签的多核苷酸序列。优选地，所述表达载体中，如权利要求1所述的多核苷酸的3’端连接有表达His×6标签的多核苷酸序列。

4.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为大肠杆菌表达载体，优选为pET-28a(+)。

5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求2至4中任一项所述的表达载体；或者

所述宿主细胞的基因组中整合有如权利要求1所述的多核苷酸。

6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌。

7.一种制备吡喃糖氧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

培养如权利要求5或6所述的宿主细胞，以表达出目的蛋白；和

分离所述目的蛋白，即得所述吡喃糖氧化酶；

其中，所述目的蛋白具有如氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，培养所述宿主细胞时，通过IPTG诱导以表达出目的蛋白。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述分离所述目的蛋白的步骤包括使用Ni-NTA柱洗脱，收集目的蛋白洗脱液。

10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：如权利要求1所述的多核苷酸；或者

如权利要求2至4中任一项所述的表达载体；或者

如权利要求5或6所述的宿主细胞；或者

或者根据权利要求7至9中任一项所述的方法所制备的吡喃糖氧化酶。