[发明专利]一种固定化蛋白酶Fe3

权利要求书

1.一种固定化蛋白酶Fe₃O₄磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、水稻秸秆的改性处理：将水稻秸秆粉碎、过筛、清洗和干燥后，置于真空环境中进行炭化，得到水稻秸秆炭，之后将所述水稻炭溶于水中，并加入植物复合水解酶进行酶解，得到水稻秸秆改性处理液；

S2、Fe₃O₄磁性纳米粒子的改性处理：将步骤S1中制得的水稻秸秆改性处理液与Fe₃O₄磁性纳米粒子混合，恒温条件下，搅拌均匀，得到混合液，之后将所述混合液均匀滴加到有机溶剂中，得到微球，然后依次用有机溶剂和去离子水充分洗涤微球，最后以微球和壳聚糖季铵盐为原料，采用反相微乳液法制备得到改性Fe₃O₄磁性纳米粒子，使改性Fe₃O₄磁性纳米粒子表面带有伯氨基；

S3、固定化蛋白酶Fe₃O₄磁性纳米粒子的制备：将步骤S2中制得的改性Fe₃O₄磁性纳米粒子加入到含有蛋白酶的缓冲液中，然后依次加入碳化二亚胺、琥珀酰亚胺酯进行共价交联反应，反应结束后，经磁分离得到的产物用PBS缓冲液冲洗，即可制得固定化蛋白酶Fe₃O₄磁性纳米粒子。

2.如权利要求1所述的固定化蛋白酶Fe₃O₄磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述炭化的温度为200～250℃，炭化的时间为30～60min。

3.如权利要求1所述的固定化蛋白酶Fe₃O₄磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述植物复合水解酶的添加量为10～20U/mL，所述酶解反应的温度为28～37℃，反应的时间为1～2h，所述水稻秸秆改性处理液中水稻秸秆的质量分数为5～10％。

4.如权利要求1所述的固定化蛋白酶Fe₃O₄磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述水稻秸秆改性处理液中加入的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量分数为1～5％，所述恒温温度为70～80℃，所述搅拌时间为45～60min。

5.如权利要求1所述的固定化蛋白酶Fe₃O₄磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇中的一种或多种。

6.如权利要求1所述的固定化蛋白酶Fe₃O₄磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述微球和所述壳聚糖季铵盐的质量比为1：(0.5～0.8)。

7.如权利要求6所述的固定化蛋白酶Fe₃O₄磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，反相微乳液法制备过程如下：将所述微球和所述壳聚糖季铵盐分别溶于等体积水后形成溶液，以环己烷为油相，Triton X-100和异丁醇为复合乳化剂，分别加入上述微球溶液和壳聚糖季铵盐溶液，制得油包水型乳液A和油包水型乳液B；之后将所述油包水型乳液B加入到所述油包水型乳液A中，在50～60℃的条件下，搅拌反应1～2h后，得到产物，所述产物经无水乙醇洗涤后干燥，即可得到改性Fe₃O₄磁性纳米粒子。