[发明专利]一种抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗的构建方法，其特征在于，包括下列步骤：

（1）合成5’端依次为体外转录启动子、内部核糖体进入位点IRES、N6-甲基腺嘌呤m6A位点、传染性脾肾坏死病毒开放读码框的融合序列P-IRES-m6A-MCP；

（2）将P-IRES-m6A-MCP序列克隆进载体，获重组质粒pP-IRES-m6A-MCP；

（3）pP-IRES-m6A-MCP酶切后回收得到P-IRES-m6A-MCP片段或以pP-IRES-m6A-MCP模板PCR扩增得到P-IRES-m6A-MCP片段；

（4）以P-IRES-m6A-MCP片段为模板，进行体外转录，然后消化去除DNA，获体外转录的RNA；

（5）体外转录的RNA连接为环状RNA，即抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗。

2.根据权利要求1所述抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗的构建方法，其特征在于，所述体外转录启动子为T7或SP6启动子。

3.根据权利要求1所述抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗的构建方法，其特征在于，所述内部核糖体进入位点IRES为脑心肌炎病毒的内部核糖体进入位点IRES。

4.根据权利要求1所述抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗的构建方法，其特征在于，所述传染性脾肾坏死病毒开放读码框为传染性脾肾坏死病毒衣壳蛋白MCP开放读码框。

5.根据权利要求4所述抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗的构建方法，其特征在于，所述传染性脾肾坏死病毒开放读码框的序列为Sequence ID:AF370008.1。

6.根据权利要求1所述抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗的构建方法，其特征在于，以P-IRES-m6A-MCP片段为模板，用RNA聚合酶体外转录，用DNase消化，去除DNA，获体外转录的RNA。

7.根据权利要求1所述抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗的构建方法，其特征在于，体外转录的RNA用RNA连接酶连接后，用RNase R处理去除线性的RNA分子，获环状RNA。

8.根据权利要求1所述抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗的构建方法构建的抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗。

9.权利要求8所述抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗在制备抗传染性脾肾坏死病毒的疫苗中的应用。

10.权利要求8所述抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗在制备抗传染性脾肾坏死病毒的药物中的应用。