[发明专利]一种筛选人类LncROR基因含量多态性的引物组及检测方法

说明书

本发明涉及筛选人类LncROR基因技术领域，具体地说就是一种筛选人类LncROR基因含量多态性的引物组及检测方法。一种筛选人类LncROR基因含量多态性的引物组及检测方法，其核苷酸序列如IDNO.1～3所示，所述引组物用于筛选人类血清外泌体中都含有的长链非编码RNALncROR基因含量阈值多态性。一种筛选人类LncROR基因含量多态性的检测方法，包括上述引物组，核苷酸序列为IDNO.1～3所示的引组物，以检测时间15或20min的检测线测定需求阈值。本申请方法将试剂盒中肽核酸(PNA)预先与样本DNA结合，然后利用重组酶聚合酶扩增(RPA)极为快速的扩增技术，并结合等位基因特异性扩增(ASA)在15min和20min(样本中无干扰组织的理想情况下)筛选出LncROR1基因含量多态性。

技术领域

本发明涉及筛选人类LncROR基因技术领域，具体地说就是一种筛选人类LncROR基因含量多态性的引物组及检测方法。

背景技术

快速、准确并且简便的基因多态性筛查方法一直受到广泛的重视。人类基因组是一个十分稳定的体系，不同的民族、群体和个体都有46条染色体，有相同数目的基因和基因分布，也有基本相同的核苷酸序列。正是基因组结构的这种稳定性保证了人类作为一个物种的共同性和稳定性，也决定了目前基因组测定是有意义的，即有代表性的。

长链非编码RNA(Longnon-codingRNA，LncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA。研究表明，LncRNA在剂量补偿效应(Dosagecompensationeffect)、表观遗传调控、细胞周期调控和细胞分化调控等众多生命活动中发挥重要作用，成为遗传学研究热点。

其中，LncROR1被认为是个非常有潜力的靶点，因为它作为酪氨酸激酶受体，具有可药性；其次，它在细胞表面表达；更重要的是，它在肿瘤细胞中高度表达，而在成人健康组织中表达量很低。目前有多家公司在开发靶向ROR1的抗癌疗法，其中包括单克隆抗体、抗体偶联药物(ADC)、双特异性抗体、以及CAR-T疗法等多种治疗模式。到目前为止，基于聚合酶链反应(PCR)扩增DNA的测序技术已成为一个标准技术，然而，由于该标准技术需要大型的设备和复杂的实验步骤，包括热循环设备和DNA测序设备等，目前的分子筛选方法仍然大大阻碍该基因多态性检测的效果。

发明内容

为解决上述LncROR1检测方法需要大型设备并且操作复杂的问题，本发明提供了一种筛选人类LncROR基因含量多态性的引物组及检测方法。

本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：一种筛选人类LncROR基因含量多态性的引物组及检测方法，其核苷酸序列如IDNO.1～3所示，所述引组物用于筛选人类血清外泌体中都含有的长链非编码RNALncROR基因含量阈值多态性。

一种筛选人类LncROR基因含量多态性的检测方法，包括上述引物组，核苷酸序列为IDNO.1～3所示的引组物，以检测时间15或20min的检测线测定需求阈值。

作为优化，包括如下步骤：

S1.准备浓度分别为300ng/μL、200ng/μL、100ng/μL、50ng/μL、25ng/μL、10ng/μL、1ng/μL、0.1ng/μL、0.01ng/μL、0.001ng/μL、0.0001ng/μL、0.00001ng/μL的逆转录样本ctDNA各2μL；

S2.将11.5μL双蒸水、2μL的浓度为10μM的正向引物IDNO.1、2μL的浓度为10μM的反向引物IDNO.2、0.5μL的浓度为10μM的探针引物IDNO.3、步骤S1的逆转录样本ctDNA、和29.5μL重泡胀缓冲液依次加入到含有冻干扩增酶的EP管中，混匀；

S3.向混匀后的步骤S2所得溶液中加入2.5μL浓度为280mM的醋酸镁溶液，混匀；

S4.步骤S3所得的混合溶液扩增20min；