[发明专利]一种评估抗原沉默效应对抗体药效影响的方法及其应用

权利要求书

1.一种评估抗原沉默效应对抗体药效影响的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1).将待测抗体用BSA-PBS稀释，从300nM开始，3倍稀释至0.0051nM，共11个点；将去除血浆的人全血用BSA-PBS进行10倍稀释，Jurkat细胞系用BSA-PBS重悬成1.2×10⁷个/mL的密度；将10倍稀释的血液细胞溶液或Jurkat细胞悬液接种到96孔圆底培养板中，每孔加入100ul，离心后甩走上清，每孔加入100ul稀释好的抗体溶液重悬，于4℃孵育1小时，离心后再将上清转移到新板中备用，即为经过抗原沉默处理的抗体溶液；

2).表达TAA靶点的肿瘤细胞经过CFSE染色后，用BSA-PBS重悬成0.8×10⁶个/mL的密度，接种到96孔圆底培养板中，每孔加入100ul，离心后甩走上清，每孔加入100ul经过抗原沉默处理的抗体溶液重悬，于4℃孵育1小时，洗两遍后，每孔加入100ul荧光标记的二抗溶液重悬，于4℃避光孵育半小时，洗两遍后，用BSA-PBS重悬进行流式检测，圈出CFSE阳性的肿瘤细胞群，并用FlowJo软件分析抗体在细胞表面结合的平均荧光强度。

2.如权利要求1所述的一种评估抗原沉默效应对抗体药效影响的方法，其特征在于，所述BSA-PBS的体积浓度为1％。

3.如权利要求1或2所述的一种评估抗原沉默效应对抗体药效影响的方法，其特征在于，所述待测抗体为靶向CD47与肿瘤相关抗原的双特异性抗体CD47 x TAA和/或靶向CD47的单克隆抗体。

4.如权利要求1所述的一种评估抗原沉默效应对抗体药效影响的方法在检测抗原沉默效应对抗体阻断SIRPα与细胞结合的影响中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

将带有mFc标签的SIRPα蛋白用BSA-PBS稀释成3ug/ml的溶液；表达TAA靶点的肿瘤细胞经过CFSE染色后，用BSA-PBS重悬成2×10⁶个/mL的密度，接种到96孔圆底培养板中，每孔加入40ul，再每孔加入40ul所述的SIRPα蛋白溶液和40ul所述经过抗原沉默处理的抗体溶液，混匀后于4℃孵育2小时，清洗后，每孔加入100ul荧光标记的抗mFc的二抗溶液重悬，于4℃避光孵育半小时，清洗后，用BSA-PBS重悬进行流式检测，圈出CFSE阳性的肿瘤细胞群，并用FlowJo软件分析SIRPα蛋白在细胞表面结合的平均荧光强度。