[发明专利]一种检测CD16A基因多态性的试剂盒及其应用和使用方法

权利要求书

1.一种检测CD16A基因多态性的试剂盒，包括试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括扩增CD16A基因序列的第一引物对和检测CD16A基因rs396991位点多态性的第二引物对和荧光探针；

所述扩增CD16A基因序列的第一引物对，其正向引物核苷酸序列为CD16A-F1：5’-TGGGGTGTCTGTGTCTTTCA-3’，其反向引物核苷酸序列为CD16A-R1：5’-CTTTGATGTGACCTTAGGGAAACT-3’，能与CD16A基因的rs396991位点上下游特异性结合并扩增出包含rs396991位点的基因序列；

所述检测CD16A基因rs396991位点多态性的第二引物对，其正向引物核苷酸序列为CD16A-F2：5’-TGGGGTGTCTGTGTCTTTCA-3’，其反向引物核苷酸序列为CD16A-R2：5’-TGCAAACCTACCCTGCAATC-3’；

所述荧光探针包括检测CD16A基因rs396991位点多态性的探针，所述探针包括：

第一探针158F-probe：5’-FAM-TTACTCCCAAAAAGCCCCCTG-MGB-3’；

第二探针158V-probe：5’-HEX-TTACTCCCAACAAGCCCCCTG-MGB-3’。

2.如权利要求1所述的一种检测CD16A基因多态性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括2×PCR反应液，2×探针型PCR反应液和无核酸酶无菌去离子水，FF型参考品，FV型参考品，VV型参考品。

3.如权利要求1所述的一种检测CD16A基因多态性的试剂盒，其特征在于，所述第一引物对和第二引物对的浓度总和为10uM，荧光探针浓度为5uM。

4.如权利要求1-3任一所述的一种检测CD16A基因多态性的试剂盒在制备用于检测乳腺癌马吉妥昔单抗药物治疗敏感性的试剂中的应用。

5.如权利要求1-3任一所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法包括以下步骤：

S1、基因组待测DNA提取；

S2、采用该检测CD16A基因多态性的试剂盒，对S1中提取到的基因组DNA进行PCR扩增，并同时进行参考品的扩增，扩增结束后进行磁珠纯化或琼脂糖凝胶电泳回收900-1000bp片段大小核酸产物；

S3、采用该检测CD16A基因多态性的试剂盒，对步骤b中PCR纯化产物，进行Tapman分型检测。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，S2中所述的PCR扩增反应条件如下：

。

7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，S1中待测DNA取自肿瘤组织标本或外周血基因组DNA。