[发明专利]一种检测CD16A基因多态性的试剂盒及其应用和使用方法

说明书

本发明公开了一种检测CD16A基因多态性的试剂盒及其应用和使用方法，试剂盒包括扩增CD16A基因序列的第一引物对和检测CD16A基因rs396991位点多态性的第二引物对和荧光探针；扩增CD16A基因序列的第一引物对；检测CD16A基因rs396991位点多态性的第二引物对；荧光探针包括检测CD16A基因rs396991位点多态性的探针，探针包括：第一探针158F‑probe：5’‑FAM‑TTACTCCCAAAAAGCCCCCTG‑MGB‑3’；第二探针158V‑probe：5’‑HEX‑TTACTCCCAACAAGCCCCCTG‑MGB‑3’，本发明的优点在于操作简便、准确度高、特异性好、成本低等优点。

技术领域

本发明是关于乳腺癌检测领域，具体地说，是一种检测CD16A基因多态性的试剂盒及其应用和使用方法。

背景技术

乳腺癌是世界范围内女性最常见的癌症，也是威胁我国女性健康的重大杀手。据2020年年底，世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布的全球最新癌症负担数据，全球乳腺癌新发病例高达226万例，首次正式取代肺癌(220万)成为全球第一大癌症，占所有新增癌症患者的11.7％。

研究表明，HER2在20-30％的原发性乳腺浸润性导管癌中存在基因的扩增和蛋白的过度表达。HER2阳性的乳腺癌对常规的化疗和内分泌治疗反应差，肿瘤浸润性强，无病生存期端，预后差。为此，多种阻断HER2的抗癌药物相继问世，其中，目前经FDA批准最为常用的此类药物是曲妥珠单抗，它是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，选择性的作用于HER2的细胞外部分，适用于治疗HER2过度表达的乳腺癌。

为获得更长的生存期，HER2+MBC治疗方案不断进行探索，研发出新型治疗药物。2020年12月，FDA批准Margetuximab(马吉妥昔单抗)上市，用于治疗既往接受过两种及以上抗HER2的转移性HER2阳性乳腺癌成年患者。Margetuximab(马吉妥昔单抗)是一种基因工程改造药物，通过对Fc段改造而增强免疫活性。马吉妥昔单抗的Fab段可以和HER2特异性结合，修饰的Fc段可通过增强抗体介导细胞依赖细胞毒(ADCC)效应来增加对肿瘤细胞的杀伤作用。

不同免疫细胞表达的Fcγ受体(FcγR)具有不同功能，FcγRⅡa(CD32A)和FcγRⅢa(CD16A)属于激活性受体，FcγRⅡb(CD32B)属于抑制性受体，FcγR的基因多态性影响其与IgG抗体的结合，最终影响HER2单克隆抗体临床疗效。回顾性研究显示，在HER2+乳腺癌中，CD16A受体上158位氨基酸的不同等位基因表达影响疗效，数据表明，MBC患者携带CD16A-158F基因可能与曲妥珠单抗治疗后更低的客观缓解率和更短的无进展生存期(PFS)相关。在辅助治疗的相关研究中显示，携带CD16A-158FF基因型的患者接受曲妥珠单抗表现出不良预后和更短的无病生存期(DFS)，而目前该结论还需要更多的数据支持。

Fc段修饰的马吉妥昔单抗可以调节免疫应答。Fc修饰与CD16A亲和力增加，增强固有免疫，与CD32B亲和力下降，增强获得性免疫。上述亲和力的改变，使得马吉妥昔单抗诱导免疫反应比曲妥珠单抗更具有优势。

文献研究中，Tahar van der Straaten等人阐述了一种特异性于rs396991且不共扩增CD16B的焦磷酸测序方法，并显示该方法与Life Technologies公司的一种用于rs396991的市售TaqMan基因分型方法(C__25815666_10)100％一致。然而，他们没有证明C__25815666_10的特异性，因为克隆和测序的TaqMan产物与CD16A和CD16B都是100％同源的。

因此，考虑CD16A及CD16B基因组高度同源性的问题，开发一种特异性扩增CD16A，并基于Taqman基因分型方法分析CD16A基因rs396991位点多态性的试剂盒是有必要的。

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