[发明专利]类球红细菌接合转化方法在审
| 申请号： | 202111660667.0 | 申请日： | 2021-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN115181753A | 公开（公告）日： | 2022-10-14 |
| 发明（设计）人： | 朱洁;陈长廷;刘宝秀;黄美娟;陈清颖 | 申请（专利权）人： | 杭州恩和生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N1/21;C12R1/19;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京善任知识产权代理有限公司 11650 | 代理人： | 王大方;孟桂超 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市经济技术开*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 类球红 细菌 接合 转化 方法 | ||
1.一种类红球细菌接合转化方法，其包括以下步骤：
(1)培养基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001；
(2)转化靶标质粒进入所述基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001，得到含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001；
(3)培养通过步骤(2)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001至OD600为0.3～0.7；
(4)培养类球红细菌至OD660为1.8～2.0；
(5)将步骤(3)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001和步骤(4)得到的类球红细菌混合，进一步培养；
(6)得到含有靶标质粒的类红球细菌。
2.根据权利要求1所述的接合转化方法，其中，所述步骤(1)中包括制备基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001的感受态细胞。
3.根据权利要求2所述的接合转化方法，其中，将制备好的感受态细胞分装至单管、8连管、24孔板、96孔板或者384孔板中。
4.根据权利要求1所述的接合转化方法，其中，所述步骤(3)包括将通过步骤(2)得到的经转化的基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001接种至单管、8连管、24孔板、96孔板或者384孔板中进行培养。
5.根据权利要求1所述的接合转化方法，其中，所述步骤(3)中培养通过步骤(2)得到的经转化的基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001至OD600为0.42。
6.根据权利要求5所述的接合转化方法，其中，所述步骤(4)中培养类球红细菌至OD660为1.94。
7.根据权利要求1所述的接合转化方法，其中，所述步骤(5)中将步骤(3)得到的经转化的基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001和步骤(4)得到的类球红细菌在单管、8连管、24孔板、96孔板或者384孔板中进行混合。
8.根据权利要求7所述的接合转化方法，其中，将进行混合所得的混合液涂布至不含五胺基酮戊酸的平板上，无需再次涂布分离大肠杆菌和类球红细菌。
9.根据权利要求7所述的接合转化方法，其中，所述步骤(5)中无需使用硝化纤维薄膜。
10.一种通过权利要求1～9所述的接合转化方法制备的类球红细菌。
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