[发明专利]类球红细菌接合转化方法

说明书

本发明提供一种类红球细菌接合转化方法，其包括以下步骤：(1)培养基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001；(2)转化靶标质粒进入所述基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001，得到含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001；(3)培养通过步骤(2)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001至OD600为0.3～0.7；(4)培养类球红细菌至OD660为1.8～2.0；(5)将步骤(3)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001和步骤(4)得到的类球红细菌混合，进一步培养；(6)得到含有靶标质粒的类红球细菌。使用本发明的接合转化方法，避免了再次涂布分离大肠杆菌和类球红细菌，并且提高了接合转化效率，使得获得的类球红细菌单克隆菌株相比于其他条件提高至少3倍。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体地，涉及一种类红球菌接合转化方法。

背景技术

类球红细菌是一种工业相关宿主，用于生产各种分子，如氢、营养食品和商业化学品。然而，它对质粒的化学转化效率较低，尤其是那些大于10kb的质粒。因此，接合是一种有吸引力的替代方法，它依赖于跨细菌物种通过形成桥来转移遗传物质的能力。通常，使用包含整合在染色体中的必要转移基因(例如S17-1)的“供体”大肠杆菌菌株进行接合。但是，接合转化仍然面临着一些问题，例如，需要将大肠杆菌以及类球红细菌混合后涂布至硝化纤维薄膜，并在经过培养之后重新收集菌体。由于此步骤在人工操作的环境下只能一次处理一个样品，对实验通量(单位时间内可进行的实验样本数)有实质限制。而类球红细菌作为一种工业相关发酵菌种，需要能够批量地进行接合。与此同时，接合转化仍然存在转化效率较低的问题。

因此，目前需求一种能够提高类球红细菌接合转化方法的通量，以及接合转化效率的方法，使之能够运用于工业化生产。

发明内容

为了解决上述问题，第一方面，本发明提供了一种类红球细菌接合转化方法，其包括以下步骤：

(1)培养基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001；

(2)转化靶标质粒进入所述基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001，得到含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001；

(3)培养通过步骤(2)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001至OD600为0.3～0.7；

(4)培养类球红细菌至OD660为1.8～2.0；

(5)将步骤(3)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001和步骤(4)得到的类球红细菌混合，进一步培养；

(6)得到含有靶标质粒的类红球细菌。

使用本发明的接合转化方法，提高了接合转化效率，使得获得类球红细菌单克隆菌株相比于其他条件提高至少3倍。

如本文所述“基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001”为ATCC编号为47005的大肠杆菌进行hemA基因敲除的改造而获得。

所述基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001是hemA基因敲除的大肠杆菌。

在一些具体的实施方案中，步骤(1)包括制备基因缺陷型大肠杆菌SD1149-00的感受态细胞。

在一些具有的实施方案中，将制备好的感受态细胞分装至单管或者8连管或者24孔板或者96孔板或者384孔板中。

在一些具体的实施方案中，将制备好的感受态细胞分装至96孔板中。

在一些具体的实施方案中，步骤(3)包括将通过步骤(2)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149-001接种至单管或者8连管或者24孔板或者96孔板或者384孔板中进行培养。进一步地，进行隔夜培养。