[发明专利]一种DNA直接扩增试剂及其应用

权利要求书

1.一种核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂包含：多铵、还原剂、N,N-二甲基甲酰胺、酒石酸、十二烷基二苯醚二磺酸钠、Brij 30和水。

2.根据权利要求1所述的核酸释放剂，其特征在于：

所述核酸释放剂包含：10-200mM多铵、1-10mM还原剂、1-20％N,N-二甲基甲酰胺、0.1-10mM酒石酸、0.01-0.5％的十二烷基二苯醚二磺酸钠、0.01-5％Brij 30和余量的水；优选的是，所述核酸释放剂的pH为10.0-13.5；

另外优选的是，所述核酸释放剂包含：20-100mM多铵、2-5mM还原剂、2-10％N,N-二甲基甲酰胺、0.2-5mM酒石酸、0.02-0.2％的十二烷基二苯醚二磺酸钠、0.05-2％的Brij 30和余量的水；更优选的是，所述核酸释放剂的pH为10.5-12.5；

另外优选的是，所述核酸释放剂包含：50mM多铵、2mM还原剂、5％N,N-二甲基甲酰胺、1mM酒石酸、0.15％的十二烷基二苯醚二磺酸钠、1.5％的Brij 30和余量的水；更优选的是，所述核酸释放剂的pH为12.0。

3.根据权利要求1或2所述的核酸释放剂，其特征在于：

所述多铵为三亚乙基四胺或二亚乙基三胺和/或其组合；和/或

所述还原剂为二硫苏糖醇、TCEP-HCl(三(2-羧乙基)膦盐酸盐)、巯基乙醇、半胱氨酸、维生素C、连二亚硫酸盐、巯基乙酸和/或其组合。

4.一种直接扩增试剂，其特征在于，所述直接扩增试剂包含：Tris-HCl，硫酸铵，dNTPs，BSA，MgCl₂，耐受型热启动DNA聚合酶和聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-马来酸)钠盐。

5.根据权利要求4所述直接扩增试剂，其特征在于：

所述直接扩增试剂包含：10-200mM Tris-HCl，10-100mM硫酸铵，100-500μM的dNTPs，100-800μg/mL的BSA，1-10mM的MgCl₂，1-5U的耐受型热启动DNA聚合酶和0.1-10mM的聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-马来酸)钠盐；

优选的是，所述直接扩增试剂包含如下物质：20-100mM Tris-HCl，20-80mM硫酸铵，200-400μM的dNTPs，200-500μg/mL的BSA，2-6mM的MgCl₂，2-5U的耐受型热启动DNA聚合酶和1-5mM的聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-马来酸)钠盐；

更优选的是，所述直接扩增的试剂包含：50mM Tris-HCl，40mM硫酸铵，300μM的dNTPs，300μg/mL的BSA，2mM的MgCl₂，2U的耐受型热启动DNA聚合酶和2.5mM的聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-马来酸)钠盐。

6.根据权利要求4或5所述的直接扩增试剂，其特征在于：

所述聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-马来酸)钠盐的分子量为20000；

优选的是，在聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-马来酸)钠盐中，苯乙烯磺酸单元与马来酸单元的摩尔比为3:1；

另外优选的是，所述耐受型热启动DNA聚合酶为Jumbo^TM Taq Hot-Start DNAPolymerase。

7.一种对生物样本的DNA进行定量或定性分析的方法，其特征在于：

所述方法使用权利要求1至3中任一项所述的核酸释放剂制备待检测样本；和/或

所述方法采用权利要求4或5所述的直接扩增试剂通过PCR扩增来对所述生物样本中的DNA进行定量或定性分析。